漏芦抑制单核细胞源性泡沫细胞形成的机理研究-中西医结合基础专业论文.docx

漏芦抑制单核细胞源性泡沫细胞形成的机理研究中文摘要 漏芦抑制单核细胞源性泡沫细胞形成的机理研究 中文摘要 动脉粥样硬化(htherosclerosiS，AS)是心脑血管疾病的主要病理生理基础。众所周知． As形成与脂质代谢异常有关，尤其与氧化型低密度脂蛋白(Oxidized Low Density Lipoprotein，oxLDL)有关，oxLDL被巨噬细胞清道夫受体(Scavenger，SR)所识别、摄取， 且不受细胞内胆固醇的反馈抑制，结果细胞内脂质大量积聚，巨噬细胞转变成富含胆固醇酯 的泡沫细胞一一As形成早期脂肪条纹的主要细胞类型；CD36是oxLDL的主要受体，在泡沫 细胞形成过程中，oxLDL首先作用于CD36受体，然后通过激活核受体使CD36表达增加，促 进单核细胞分化成巨噬细胞并摄取oxLDL形成泡沫细胞；而活化的巨噬细胞和oxLDL又能加 速As的进展。因此，巨噬细胞、oxLDL、CD36在As的发生发展中具有重要作用，也一直是 As研究的重点。 整体动脉粥样硬化动物模型研究表明，漏芦水提物可使As病变减轻。对祁州漏芦水煎 剂成分进行分析，漏芦含有多种化学成分，研究者曾从漏芦根和叶中提取了蜕皮甾酮，产率 较高。因此，为了深入研究漏芦的抗As的作用机制及发现其可能的有效成分，我们在本课 题的前期研究基础上，进行了如下的实验研究，旨在通过分析漏芦血清药及蜕皮甾酮对单核 细胞摄取oxLDL和CD36表达的影响，进一步证明漏芦抗As的可能机制及对蜕皮甾酮做初步 的药效学筛选。 本研究分为三个部分： 实验一 荧光标记法检测U937细胞对oxLDL的摄取作用 本实验应用异硫氰酸荧光素(fluorcsccin isocyanate，F1TC)标记oxLDL，通过流式细胞 仪检测不同浓度oxLDL的作用下U937细胞摄取oxLDL的量，并在显微镜下观察U937细胞的 形态学改变和计算活细胞率。结果发现，在lOug／ml至80ug／ml浓度范围内，随着oxLDL浓 度的增加，U937细胞摄取oxLDL的量亦增加(PO．05)，而当oxLDL浓度继续增加时，摄取 量并无明显增加(PO．05)，细胞损伤反而加重，活细胞率下降(PO．05)。因此确立了 80ug／m]oxLDL下U937细胞摄取oxLDL的量作为下一步药效学研究的基础。 实验二漏芦血清药及蜕皮甾酮对U937细胞摄取oxLDL的影响 本实验观察了不同浓度、不同时间点满芦血清药以及不同浓度的蜕皮甾酮对U937细胞 摄取oxLDL的影响。取给药后1．5h的彼格犬血清，以浓度为珊、10％、15％、20％来干预U937 细胞对oxLDL的摄取，并分别与相同浓度空白血清组对照，结果显示15％、2096的漏芦血清 药可抑制U937细胞摄取oxLDL(PO．05)；在此基础上，我们研究了0．5h、1．5h、3h、6h、 12h、24h的漏芦血清药对U937细胞摄取oxLDL的影响，终浓度均为15％，与空白血清组对 照，结果显示1．5h、3h、6h的漏芦血清药可抑制U937细胞摄取oxLDL(PO．05)；此外，进 一步研究发现，终浓度分别为25、50。100、200mg／l的蜕皮甾酮对U937细胞摄取oxLDL无 抑制作用(PO 05)。以上结果提示，漏芦可能通过抑制泡沫细胞形成过程中的单核细胞摄 取oxLDL，从而抑制As形成；而蜕皮甾酮的原形成分可能对泡沫细胞的形成无抑制作用。 中文摘要实验三蜕皮甾酮对泡沫细胞形成过程中CD36表达的影响 中文摘要 实验三蜕皮甾酮对泡沫细胞形成过程中CD36表达的影响 本实验观察了不同浓度的蜕皮甾酮对泡沫细胞形成过程中CD36表达的影响。通过 80ug／nll的oxLDL作用于U937细胞建立泡沫细胞模型，并以终浓度为15％的1．5h漏芦血清 药为阳性对照组，蜕皮甾酮组浓度分别为25、50、100、200mg／1，结果显示，蜕皮甾酮对 泡沫细胞形成过程中CD36的表达无抑制作用(PO．05)。 研究结果表明：(1)漏芦血清药具有抻制As中泡沫细胞形成的作用。(2)不同浓度的 漏芦血清药对单核细胞摄取oxLDL的抑制作用不同，提示漏芦的抗As作用可能与药物剂量 有关。(3)不同时间点的漏芦血清药对单核细胞摄取oxLDL的抑制作用不同，提示不同时间 点的漏芦血清药的药物有效成分群不同。(4)蜕皮甾酮的原形成分可能对单核细胞源性泡沫 细胞的形成无抑制作用，但并不能证明其在体内的代谢产物对泡沫细胞的形成无抑制作用。 关键词：漏芦蜕皮甾酮动脉粥样硬化氧化型低密度脂蛋白CD36受体单核／巨噬细 胞泡沫细胞 生一 生一