类固醇激素对鸡胚下丘脑神经元增殖调控的研究-基础兽医学专业论文.docxVIP

浙江大学硕士学位论文缩略词表 浙江大学硕士学位论文 缩略词表 (Abbreviations) 缩写 英文 中文 5a-R 5a-reduclase 5a-还原酶 A androgen 雄激素 AI 盯omatase inhibitor 芳香化酶抑制剂 AR androgen receptor 雄激素受体 Ara-C cytosine arabinoside 阿糖胞苷 ARC arcllflte nucleus 弓状核 AROM aromatase 芳香化酶 BrdU bromodeoxym-id”o 5-溴脱氧尿苷 CEE chicken embryonic ex口acc 鸡胚浸出液 CNS central system 中枢神经系统 DHT dihydrotestosterone 双氢睾酮 E2 17pestradiol 17辟雌二醇 ER estrogen receptor 雌激素受体 FLU flutamide 氟他胺 GFAP 四ial fibrillary acid protein 胶质纤维酸性蛋白 GnRH gonadotropin·releasing hormone 促性腺激素释放激素 HPG hypothalamus—pituitary-gonadal axis 下丘脑一垂体一性腺轴 LET letrozole 来曲唑 LI labeling index 标记率 ME median eminence 正中隆起 NSE neuron—specific cnolase 神经元特异性烯醇化酶 PCNA proliferating cell nuclear antigen 增殖细胞核抗原 POA preoptic area 视前区 POM medial preoptic area 视前内侧区 PPN periventricular preoptic nucleus 视前室周核 PVN paraventricular nucleus 室旁核 SDN—PeA sexual dimorphic nucleus ofpreoptic 视前区性别双形性核团 T testosterone 睾酮 TMX tamoxifen 他莫西芬 浙江大学硕士学位论文摘 浙江大学硕士学位论文 摘 要 下丘脑是生物机体内重要的神经内分泌中枢，控制着机体众多生理活动。在下 丘脑．垂体．性腺轴(HPG)中，下丘脑分泌的促性腺激素释放激素((枷5m)调节腺 垂体分泌促性腺激素，即卵泡刺激素(FSH)和黄体生成素(LH)，二者又可刺激性 腺分泌性激素，包括雌二醇(E2)和睾酮(T)，同时性激素又能对下丘脑的激素分 泌起到反馈调节作用，因此性腺与下丘脑之间存在着密切的联系。本实验选用鸡胚 下丘脑，采用神经细胞体外培养模型来研究性激素对下丘脑神经元增殖的影响，并 探讨其机理。 本实验建立了17胚龄鸡下丘脑神经元一胶质细胞体外共培养模型。在原代培养 的下丘脑神经细胞中，选用添加2．5％去类固醇血清的DMEM培养液，培养3d后将 培养液更换成添加10pg／mL胰岛素、5 p．g／mL转铁蛋白和3×10罐m01／L亚硒酸钠的无 血清DMEM，即ITS培养液，以抑制胶质细胞的过度增殖、排除血清中的复杂成分 对下一步实验的干扰。该培养体系中神经元胞体饱满，两端有突起；胶质细胞胞体 扁平，呈不规则状。神经元特异性烯酵化酶(NSE)免疫细胞化学染色呈阳性：胶 质细胞胶质纤维酸性蛋白(GFAP)染色呈阳性。在此共培养模型中神经元具有良好 的增殖活性且能存活两周以上。 利用所建立的体外培养模型研究了性激素对下丘脑神经元增殖的调控作用。用 17p雌二醇(E2，10-s_106mol／L)和睾酮(T，1铲．10Smol／L)处理培养的细胞，48h 后观察神经元数目变化并用PCNA免疫细胞化学显示细胞的增殖活性，计算神经元 的PCNA标记率(PCNA．LI)，并通过雌激素受体(ER)免疫细胞化学染色统计ER 阳性的神经元数目。结果显示：E2(10-8 106mol／L)显著促进神经元的增殖，PCNA 染色较对照组深，且神经元阳性率也显著高于对照组。雌激素受体阻断剂他莫西芬 (TMX，10-8_lO石moFL)能抑制E2的促增殖作用。此外，对两种性别比较发现，E2 均能促进雌雄鸡胚下丘脑神经元的增殖，且高浓度的E2(1 o．7．1酽m01／10对雌性的促 增殖作用强于雄性。T(10-7 lO％ol／L)显著促进了雄性鸡胚下丘脑神经元的增殖， 而在雌性，仅高浓度的T(106mol／L)可显著促进神经元的增殖。E2、T处理后ER 阳性神经元数目显著高于对照组。上述结果提示：性激素可通过上调雌激素受体表 达等途径促进胚胎期下丘脑神经元的增殖。 2 浙江大学硕士学位论文在此基础