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* * 现代生物技术专题 宣城中学 闫立 2008-12-4 结合图片来说一说什么是基因工程？ 基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，因此又叫做DNA重组技术或基因拼接技术。 基因工程培育抗虫棉的简要过程： 普通棉花(无抗虫特性) 苏云金芽孢杆菌 提取 抗虫基因 棉花细胞(含抗虫基因) 棉花植株(有抗虫特性) 重组DNA 导入 拼接 上述培育抗虫棉的关键步骤是什么？ 普通棉花不具有抗虫性，科学家发现苏云金芽孢杆菌能够产生一种毒蛋白，对棉铃虫有一定的杀伤作用。 试设计一个简单的方案，使棉花对棉铃虫也有抵抗作用. 一、限制性核酸内切酶——“分子手术刀” 思考： 1、怎样从苏云金芽孢杆菌体内提取毒蛋白基因？ 2、这类酶主要在哪些生物中能够找得到？为什么主要存在于这一类生物？ 3、这一类酶有什么作用？ A T G C 黏性末端 黏性末端 黏性末端：被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的 核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。 一、限制性核酸内切酶——“分子手术刀” 大多数限制酶的识别序列由6个核苷酸组成，例如，EcoRΙ、SmaΙ，也有少数有4、5或8个核苷酸组成。 G A A T T C C T T A A G 中轴线 C T T A A G A A T T C G 大肠杆菌的一种限制酶（EcoRⅠ)能识别GAATTC序列，SmaI识别CCCGGG序列: C C C G G G G G G C C C C C C G G G G G G C C C 黏性末端 平末端 一、限制性核酸内切酶——“分子手术刀” 当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，产生的是平末端。 当限制酶从识别序列的中心轴线两侧切开时，产生的是黏性末端。 一、限制性核酸内切酶——“分子手术刀” 一、限制性核酸内切酶——“分子手术刀” 主要是从原核生物中分离纯化出来的一类酶。 1、来源： 4000种 2、种类： 3、作用： 识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。(6个,4、5、8个) 形成两种末端 黏性末端 平末端 4、结果： 要想获得某个目的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性末端？一个目的基因有几个黏性末端？ 要切两个切口，产生四个黏性末端，两个。 如果把两种来源不同的DNA用同一种限制酶来切割，会怎样呢？ 会产生相同的黏性末端。 是不是把两者的黏性末端黏合起来，这样就真的合成 重组的DNA分子了? 思考题： 磷酸二酯键 DNA连接酶可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来，即把梯子两边扶手的断口连接起来，这样一个重组的DNA分子就形成了。 二、DNA连接酶——“分子缝合针” G A A T T C C T T A A G 即脱氧核糖、磷酸基之间的连接 G P A P 思考： DNA连接酶作用是什么？是不是把两者的黏性末端黏合起来，这样就真的合成了重组的DNA分子? DNA连接酶和DNA聚合酶的区别是什么？ *