第一节 免疫标记技术的基本概念.pptVIP

ELISA技术的操作注意要点 试剂器材 操作环节 合适工作浓度 * 感谢你的观看 2109年5月18日 戊二醛交联法（二步法） COH-（CH2）3-COH + NH2-酶 抗体-NH2 + CHO-（CH2）3-CH = NH2-酶 抗体-NH2 =CH-（CH2）3-CH = NH2-酶 * 感谢你的观看 2109年5月18日 过碘酸盐氧化法 O O O O O O NaIO4 O O OH O O OH OH + NH2抗体 O O O N N 抗体 抗体 H2O N 抗体 NaBH4 Schiff碱 酶-五炭糖环 * 感谢你的观看 2109年5月18日 标记免疫物的分离与鉴定 1、分离 目的：去除游离酶 方法：盐析、柱层析 2、鉴定 抗体活性 酶活性 标记物纯度 * 感谢你的观看 2109年5月18日 第三节 荧光标记技术 一、常用标记方法 二、标记免疫物的分离与纯化 * 感谢你的观看 2109年5月18日 常用标记方法 1、荧光素的概念 2、生物标记荧光素的要求 3、常用荧光素标记原理与方法 * 感谢你的观看 2109年5月18日 生物标记荧光素的要求 1、具有与蛋白质共价结合的能力 2、荧光效率高 3、能与背景物质形成鲜明对比 4、不影响蛋白质的生物、免疫活性 5、标记方法安全、简便 6、标记物稳定，易保存 * 感谢你的观看 2109年5月18日 FITC的标记原理与方法 荧光素-N=C=S + NH2-抗体 荧光素-N-C-N-抗体 H S H * 感谢你的观看 2109年5月18日 RB200的标记原理与方法 荧光素-SO3Na + PCl5 荧光素-SO2 Cl + PCl3 + NaCl 荧光素-SO2 Cl + NH2-抗体 荧光素-SO2 -NH-抗体 + HCl * 感谢你的观看 2109年5月18日 标记免疫物的分离与鉴定 1、分离 目的：去除游离荧光素 方法：柱层析 2、鉴定 抗体活性 标记物结合度 F/P比值的应用意义 * 感谢你的观看 2109年5月18日 第四节 放射性核素标记技术 一、常用标记方法 二、标记免疫物的分离与纯化 * 感谢你的观看 2109年5月18日 常用标记方法 1、常用放射性核素 2、125I 的标记方法 直接法（氯胺T法） 间接法（连接法） * 感谢你的观看 2109年5月18日 直接法（氯胺T法） OH -NHCHONH- CH2 OH -NHCHONH- CH2 Na125I 4。C 125I 氯胺T * 感谢你的观看 2109年5月18日 间接法（连接法） CH2 OH O H-C-C-O-N-C-CH2 H O O=C-C-CH2 CH2 OH O H-C-C-O-N-C-CH2 H O O=C-C-CH2 + Na125I 氯胺T 125I NSHPP * 感谢你的观看 2109年5月18日 间接法（连接法） CH2 OH O H-C-C-O-N-C-CH2 H O O=C-C-CH2 CH2 OH H-C-C-N-蛋白质 H O H + NH2-蛋白质 125I 125I * 感谢你的观看 2109年5月18日 标记免疫物的分离与鉴定 1、分离 目的：去除游离放射性核素 方法：柱层析 2、鉴定 游离放射性核素含量 免疫活性 比放射性（mCi/mg）应用意义 * 感谢你的观看 2109年5月18日 本章小结 1、免疫标记技术的概念 2、常用免疫标记物质及其标记方法 3、标记免疫物质的分离与鉴定 * 感谢你的观看 2109年5月18日 思考题 1、何谓免疫标记技术？ 2、常用的免疫标记物质有哪些？ 3、酶标记的主要方法有哪些？ 4、F/P比值的实用意义如何？ 5、何谓比放射性？有何意义？ * 感谢你的观看 2109年5月18日 * 感谢你的观看 2109年5月18日 第一节 标记免疫技术的分类 一、按指示标记物质划分的类型 二、按测定方式划分的类型 三、按测定用途划分的类型 * 感谢你的观看 2109年5月18日 1、酶免疫技术 2、荧光免疫技术 3、放射免疫技术 4、发光免疫技术 5、金免疫技术 按指示标记物质划分的类型 * 感谢你的观看 2109年5月18日 1、均相型（homogenous） 2、非均相型（heterogeneous） 按测定方式划分的类型 * 感谢你的观看 2109年5月18日 均相型（homogenous） 非均相