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5. 竞争性放射免疫分析法的建立 （1）反应方式 a. 平衡法：标记抗原与待测抗原、特异性抗体同时加入温育 b. 顺序法：先加入待测抗原、特异性抗体温育一段时间后再加入标记抗原。可提高反应灵敏度 c. STAT 法：反应未达平衡时即测定，较难控制反应条件 （2）反应体系 a. 缓冲液：常用 0.05~0.1 mol/L pH 7.4~7.5 磷酸或 Tris-HCl 缓冲液。根据需要定 b. 反应体积：小体积可提高灵敏度，但增大了误差 c. 反应时间： d. 反应温度： e. 反应物比例：减少抗体与标记的用量可提高灵敏度；增加抗体与标记的用量可扩大测定范围 * 感谢你的观看 2109年5月18日 （3）分离方法 a. 对分离方法的要求： 使结合部分（B）与游离部分（F）尽可能分离完全 分离后便于放射性测量 分离效果不受外界干扰因素的影响 操作简便、分离迅速、重复性好 与游离标记物的非特异性结合尽可能小 试剂来源广泛、价格低廉 b. 常用的分离方法 二抗法：非特异性低，但沉淀较差 PEG 法：沉淀较好，但非特异性高 二抗-PEG 法：较好，现常用 磁化颗粒法： 固相法：现较常用 * 感谢你的观看 2109年5月18日 （4）添加剂的问题 a. 防腐剂：低浓度 NaN3 对分析的影响小 b. 抗凝剂：EDTA、肝素对分析无影响 c. 抑肽酶：对一般分析无影响 * 感谢你的观看 2109年5月18日 6. 放射免疫分析的数据处理 （1）数据处理的基本步骤 a. 作图法 b. 数学模型法 （2）几种数学模型 a. 一般多项式函数：普适性差，现基本不用 b. 直线法：logit-lg 转换 c. 四参数 Logistic 模型：目前常用 * 感谢你的观看 2109年5月18日 7. 放射免疫分析的质量控制 （1）放射免疫分析中的误差及引起误差的原因 a. 系统误差：由于某些特定的原因造成的带有倾向性的误差 试剂误差：标准品不准；标记物变质；抗体失效；分离剂的影响 仪器误差：测量仪器不准；加样器不准 分离误差：分离不完全或失误 数据处理误差：选用数学模型不当 b. 随机误差：偶然因素造成的误差 同位素计数的统计涨落 * 感谢你的观看 2109年5月18日 （2）放射免疫分析的质量控制指标 a. 精密度：即重复性，是评价随机误差的指标，用标准差（SD）、变异系数（CV）、精密度图（PDP）表示 b. 准确度：指测定值与真值的符合程度，偏离程度叫偏差，常以偏离真值的百分比表示，常用回收试验及平行性实验来评价 c. 灵敏度：指测定方法的最小可测值， 即能与零剂量相区别的最小剂量，以零剂量点结合率的均数减两个标准差后的结合率的对应值作为最小可测值 d. 特异性：常用交叉反应率来表示 e. 稳定性：即批间的重复性， 常以剂量反应曲线参数的稳定性来评价，主要有零管结合率（B0%）、非特异性结合率（NSB）、剂量反应曲线函数、相关系数 f. 临床有效性：诊断符合率，假阴性率、假阳性率 * 感谢你的观看 2109年5月18日 感谢你的观看 感谢你的观看 感谢你的观看 感谢你的观看 感谢你的观看 感谢你的观看 感谢你的观看 感谢你的观看 感谢你的观看 感谢你的观看 感谢你的观看 感谢你的观看 感谢你的观看 感谢你的观看 感谢你的观看 感谢你的观看 感谢你的观看 感谢你的观看 感谢你的观看 感谢你的观看 感谢你的观看 感谢你的观看 感谢你的观看 放射免疫分析技术 （Radioimmunoassay，RIA） * 感谢你的观看 2109年5月18日 核医学 治疗：肿瘤、甲亢等 诊断 体内——PET、SPECT、 放射免疫成像等 体外——放射免疫分析（RIA） * 感谢你的观看 2109年5月18日 标记免疫分析技术 用标记示踪技术观察抗原抗体一级反应的分析方法 特点：敏感性高，反应时间短，可用仪器检测结果 三大标记免疫分析技术：放射免疫、荧光免疫、酶免疫 检测方法 检测范围 生化、常规免疫 mg~μg（10-3 ~10-6 g） 荧光免疫、酶免疫 μg~ng（10-6 ~10-9 g） 放射免疫、发光免疫 n