观察血琼脂平板菌落性状及溶血情况.pptVIP

实验四 1、观察血琼脂平板菌落性状及溶血情况 2、取血平板上单个菌落涂片、染色、镜检 3、血浆凝固酶试验 4、药物敏感性试验 5、三种葡萄球菌、三种链球菌培养物观察 血琼脂平板菌落性状及溶血情况 取血平板上单个菌落涂片、染色、镜检 血浆凝固酶试验 原理：致病性葡萄球菌能产生血浆凝固酶，可凝固新鲜的人或兔血浆。此种酶的试验，常用于鉴定葡萄球菌的致病力，以区别非致病性葡萄球菌。血浆凝固酶试验有两种方法。 (二)试管法： 用于检测释放到菌体外的游离的血浆凝固酶。 1．实验材料 (1)葡萄球菌培养物。 (2)1：4稀释的兔血浆(试管装)。 (3)无菌小试管、接种环、水浴箱、酒精灯。 2．实验方法 吸取1：4稀释的兔血浆放于2支无菌小试管 中，每管0．5mL，用灭菌接种环取葡萄球菌 一满环，在一小试管内壁徐徐研磨成均匀悬 液。另一试管作为对照，将两支试管放在 37℃水浴箱中，每30min观察一次结果，观察 1～4h；观察时试管倾斜，凡血浆呈现胶胨样 凝集者即为阳性，仍呈液体者为阴性。 药物敏感性试验 细菌对抗菌药物的敏感性试验，是指在体外测定药物抑菌或杀菌能力的方法。 实验室进行药敏试验主要有两个目的：一是帮助临床医生对感染性疾病选用最佳的药物治疗；二是进行流行病学调查，了解某些细菌的耐药性变迁情况。 药敏试验的测定方法很多，常用的有扩散法、试管稀释法、琼脂稀释法和E试验等。 纸片扩散法(Bauer-kirby法) (一)实验目的：掌握纸片扩散法试验. (二)实验原理：将干燥的浸有一定浓度的抗菌药物的滤纸片放在已接种一定量某种细菌的琼脂平板上.经培养后,可在纸片周围出现无细菌生长区, 称抑菌环.目的是使学生学会此试验方法并了解其在临床治疗上的意义. (三)实验材料 (1)普通琼脂平板培养基。 (2)金黄色葡萄球菌分离培养物。 (3)大肠杆菌分离培养物。 (4)药敏纸片。 (5)其他。镊子、酒精灯、接种环等。 (四)实验方法 (1)按无菌操作法用接种环从分离培养平板上沾取细菌，反复交叉密涂于平板培养基上(注意不要划破培养基)。 (2)将小镊子用酒精灯灭菌后，分别夹取含不同抗生素的药敏纸片，贴在已接种细菌的琼脂平板上，并轻轻压紧。一般每个平板贴4~6片，各纸片中心相距约24mm，纸片距平皿边缘约15mm，各纸片间距离相等。 (3)37 ℃培养18~24h后，观察结果。 * * 脓汁中病原性球菌分离鉴定（二） (一)玻片法：用于检测结合在细胞壁上的凝固酶。 1．实验材料 (1)葡萄球菌琼脂平板(斜面)培养物。 (2)兔血浆。 (3)生理盐水、载玻片、接种环等。 2．实验方法 在载玻片两端各滴盐水1滴，取葡萄球菌培养物放人生理盐水中混成均匀菌液，在其中一端的菌液中加兔血浆1滴摇匀，立即观察结果，如血浆中有明显小凝集块出现，而生理盐水中无此现象者为阳性，若血浆中无凝集块时为阴性。此法较简便，但不如试管法敏锐、准确。 三种葡萄球菌培养物 乙型链球菌菌落(溶血环) 三种链球菌培养物 *