洛阳区猪源肉孢子虫调查及分子病原鉴定-IndexCopernicus.PDF

第 ３９卷 第４期 河 南 科 技 大 学 学 报 （自然 科 学 版 ） Ｖｏｌ．３９ Ｎｏ．４ ２０１８年　 ８月 ＪｏｕｒｎａｌｏｆＨｅｎａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（ＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅ） Ａｕｇ． ２０１８ 文章编号：１６７２－６８７１（２０１８）０４－００７３－０５　 ＤＯＩ：１０．１５９２６／ｊ．ｃｎｋｉ．ｉｓｓｎ１６７２－６８７１．２０１８．０４．０１４ 洛阳市区猪源肉孢子虫调查及分子病原鉴定 薛　瑞，韩利方，钱伟锋，何　斌，闫文朝 （河南科技大学 动物科技学院，河南 洛阳４７１０２３） 摘要：为了了解市售猪肉中肉孢子虫（Ｓａｒｃｏｃｙｓｔｉｓ）的感染情况和病原种类，随机采集 １６４份洛阳市区不同超市 和菜市场销售的新鲜猪瘦肉，利用直接压片镜检法进行肉孢子虫包囊的初步观察。提取包囊阳性肉样的基因 组 ＤＮＡ，用基于 １８ＳｒＲＮＡ序列的肉孢子虫属特异性引物，对阳性样品基因组 ＤＮＡ进行巢式聚合酶链反应 （ＰＣＲ）扩增和序列分析。分析结果表明：所采集的１６４份样品中，镜检肉孢子虫包囊阳性 ４４份，总检出率为 ２６．８％，多为轻度或中度感染。肌肉中包囊呈棒状或梭形，大小为（３６７～１９７６） ｍ ×（１７６～２４６） ｍ。镜检 μ μ 阳性样品用巢式 ＰＣＲ进一步鉴定，均为阳性。从中挑取阳性样品２１份测序，所测得 １４份样品的 １８ＳｒＲＮＡ 序列与 ＧｅｎＢａｎｋ数据库中米氏肉孢子虫（Ｓ．ｍｉｅｓｃｈｅｒｉａｎａ）序列相似度最高，达 ９９％以上。说明洛阳市区市售 猪肉中肉孢子虫感染率高，感染主要虫种为米氏肉孢子虫。 关键词：市售猪肉；肉孢子虫；肌肉压片镜检；巢式 ＰＣＲ；１８ＳｒＲＮＡ 中图分类号：Ｓ８５５．９ 文献标志码：Ａ ０　引言 肉孢子虫病是由肉孢子虫科肉孢子虫属（Ｓａｒｃｏｃｙｓｔｉｓ）原虫引起的一种食源性人兽共患寄生虫病，呈 现世界性分布，感染率较高［１－３］。文献［２－６］报道目前能够感染猪的肉孢子虫有 ３种，即米氏肉孢子 虫（Ｓ．ｍｉｅｓｃｈｅｒｉａｎａ）、猪人肉孢子虫（Ｓ．ｓｕｉｈｏｍｉｎｉｓ）和猪猫肉孢子虫（Ｓ．ｐｏｒｃｉｆｅｌｉｓ），其中，米氏肉孢子虫对 猪具有明显的致病性，猪人肉孢子虫对人有一定的致病性，而猪猫肉孢子虫作为有效种尚存争议。国内 外对于肉孢子虫的鉴定，通常先经过病原形态学初步鉴定，再辅助流行病学调查和分子生物学鉴定等多 种方法综合分析，从而得出可靠结论［４－７］。 肉孢子虫寄生于多种动物和人的肌纤维、脏器血管内皮细胞、小肠和胆管等部位，会引起仔猪发热、 消瘦、贫血、呼吸困难和运动障碍，导致母猪泌乳量降低和流产，严重时出现死亡［３，８－９］。人体感染后，因 个人情况不同，有的表现消化道症状，有的头痛、发热，严重者出现贫血、肌肉疼痛，甚至局灶性心肌炎、 嗜酸性粒细胞增多等现象［１０－１４］。此外，由于肉孢子虫寄生在猪的肌纤维内产生包囊毒素，会引起食物 中毒［１，１４］，这使得受感染猪肉的食用价值明显降低。 据文献报道，目前能感染人的肉孢子虫有猪人肉孢子虫、人肉孢子虫（Ｓ．ｈｏｍｉｎｉｓ）、内氏肉孢子虫 （Ｓ．ｎｅｓｂｉｔｔｉ）和黑氏肉孢子虫（Ｓ．ｈｅｙｄｏｒｎｉ）共４种［１３－１４］，其中，黑氏肉孢子虫是最近被确定为在牛和人间 ［１５］ 循环感染的新种 。米氏肉孢子虫和猪人肉孢子虫在光学显微镜下可见：包囊平行于肌纤维，呈两端 略尖的棒状或梭形，大小为 ０．５３～１．２５ｍｍ，肉眼不容易辨别［２－３］。目前，猪肉占中国人消费肉类的 ６４％，但是对市售猪肉中肉孢子虫感染情况的报道比较少，猪源肉孢子虫分子流行病学方面的数据更是 缺乏［３，１２］。因此，分析中国猪源肉孢子虫流行的种类和亚型，具有重要的兽医公共卫生意义。本文通过 压片镜检和巢式聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）技术，对从洛阳市区不同超市和菜市场 随机采集的１６４份市售猪肉样品，进行了肉孢子虫感染情况调查和病原种类鉴定，为评估猪源肉孢子虫 对猪场的危害和对人的感染风险提供重要的参考数据。