圣愈汤传统煎剂和配方颗粒对骨髓抑制小鼠造血调控的实验研究-中西医结合专业论文.docx

圣愈汤传统煎剂和配方颗粒对骨髓抑制小鼠造血调控的实验研究 圣愈汤传统煎剂和配方颗粒对骨髓抑制小鼠造血调控的实验研究 成都中医药大学博士学位论文 成都中医药大学博士学位论文 PAGE PAGE 10 PAGE PAGE 13 前 言 肿瘤发病率从 20 世纪初在多数发达国家迅速增多，到了 20 世纪 50 年代很 多欧美国家肿瘤已经占了居民死亡原因的首位。据统计，1999 年肿瘤是我国城 市居民死亡的首要原因，在农村为第二位死亡原因；WHO 预测世界范围内，到 2025 年肿瘤患者仍将继续增多[1]。目前治疗肿瘤多采用外科手术、化疗、放疗等多学 科参与的综合治疗。但化疗药物对骨髓具有不同程度的抑制作用，加用放疗对骨 髓的抑制将更加明显，化疗药物影响更早期的造血干细胞，联合放疗可引起长期 骨髓毒性反应 [2]。从某种意义上来说，对骨髓抑制的控制是肿瘤化、放疗成功与 否的关键。 祖国传统医学认为，放疗、化疗后骨髓抑制基本属于气血亏虚证[3]，本着“损 者益之，虚者补之”的中医临床辨证施治原则，对放、化疗所致骨髓抑制的基本 治疗原则是以“扶正”为主，常用益气养血，健脾和胃等治疗方法。孙燕院士研 究表明，扶正中药对细胞免疫功能有一定的增强作用，这类中药对化疗和放疗所 致的肾上腺皮质和骨髓功能的抑制有一定保护作用[4]。本课题的研究对象圣愈汤 选自于清·吴谦医宗金鉴·删补名医方论，为补气益血名方 ，全方由熟地 20g、白芍15g、当归15g、川芎8g、人参20g、黄芪18g组成[5]，全方共奏补益气 血的功效 ，主治血虚证。 目前对圣愈汤 的研究主要集中在临床各科治疗各种气血亏虚证 和肿瘤病 人化疗后骨髓抑制的临床观察，其对造血系统影响的实验研究仅见少量报道，缺 乏深入地研究，许多环节尚不清楚。其是否能促进放、化疗后骨髓造血干细胞的 增殖、能否促进造血生长因子的分泌、能否改善造血微环境，而使骨髓造血功能 得以恢复，少有文献报道。与其他所有方剂一样，圣愈汤临床使用常用剂型为煎 剂。但煎剂用药量大、煎煮影响因素多，使用不太方便，特别在快速发展的现代 社会如何进一步促进传统医药走向世界是值得探索的问题。配方颗粒是其中的一 个方向。但将圣愈汤这六位中药颗粒按原方用药量比例配制出该方的配方颗粒， 其功效是否等同于传统的圣愈汤煎剂，这亦是本研究拟要解决的问题。 本研究采用临床补气益血的经典复方—圣愈汤传统煎剂和配方颗粒分别在 骨髓抑制小鼠模型上，应用造血祖细胞培养术、免疫组织化学法、流式细胞术、 酶联免疫吸附法以及半定量逆转录－聚合酶链反应法（RT-PCR）等技术，从造血 干/祖细胞增殖、细胞周期、凋亡相关蛋白表达、造血生长因子、造血微环境等 多方面，采用现代实验技术和方法较系统研究经典补气益血古方圣愈汤的传统煎 剂和配方颗粒对骨髓抑制小鼠造血功能的调控作用及其可能机制，并比较二者间 的作用是否有差异，从而为临床应用该方提供实验室依据和推进中药剂型的改革 探索做出积极的努力。 摘 要 目的：如何对抗放化疗所致的骨髓抑制，是肿瘤放化治疗成功的关键。寻找一些 有效且副反应少的药物来缓解骨髓抑制也是众多医务工作者一直努力的方向。本 研究拟选用经典的补气益血名方圣愈汤，采用现代血液学、细胞生物学技术和方 法，观察其对骨髓抑制小鼠造血的调控作用及其可能的作用机理，并将其配方颗 粒与传统煎剂作对比研究，为临床应用该方提供实验室依据。 方法：采用 60 钴（60Co）γ射线照射和注射环磷酰胺、氯霉素复合的方法制备骨 髓抑制小鼠模型，使用血细胞计数、祖细胞集落分析方法观察圣愈汤传统煎剂和 配方颗粒对骨髓抑制小鼠的外周血细胞数、各系祖细胞集落产率的影响；使用石 蜡切片技术观察圣愈汤对模型小鼠骨髓和脾脏组织形态结构的影响；使用流式细 胞术、免疫组织化学法观察圣愈汤对模型小鼠骨髓细胞增殖周期、凋亡率及凋亡 相关蛋白表达的影响；使用半定量逆转录－聚合酶链反应（RT-PCR）和酶联免 疫吸附（ELISA）法观察圣愈汤对模型小鼠部分重要的造血生长因子 mRNA 和血清 中浓度的影响；使用基质细胞培养技术、免疫组织化学术观察圣愈汤对模型小鼠 造血微环境的影响。从造血干/祖细胞、造血生长因子、造血微环境等多方面， 系统地、多层次地研究圣愈汤对骨髓抑制小鼠造血功能的调控作用及其可能机 制，并比较其配方颗粒和传统煎剂的作用有何差异。 结果：本研究发现： 1、圣愈汤传统煎剂和配方颗粒均可提高骨髓抑制小鼠外周血 WBC、RBC、 Hb、PLT 数量、骨髓有核细胞数。 2、圣愈汤传统煎剂和配方颗粒均可有效提高骨髓抑制小鼠粒系、红系和巨 核系体外造血祖细胞培养集落产率。 3、圣愈汤传统煎剂和配方颗粒均可改善骨髓抑制小鼠骨髓和脾脏组织形态 学结构，增加骨髓造血组织面积和巨核细胞数。