基因工程lecture5-DNA-cloning剖析.pptVIP

第十章 目的基因的获得 Genetic Engineering Dr. Zheng Xuesong Shanghai Institute of Technology 5.1 Strategy and protocols for DNA Cloning 基因克隆 基因克隆又称DNA克隆，其中的一项关键技术是重组DNA技术。 重组DNA是用酶学方法，将不同来源的DNA分子在体外进行特异切割、重新连接，组装成一个新的杂合DNA分子。在此基础上，这个杂合分子能够在一定的宿主细胞中进行扩增，形成大量的子代分子，此过程称基因克隆。 基因克隆的技术路线 ①分离制备待克隆的外源DNA片段 ②将靶DNA片段与载体连接，组装成重组DNA分子(recombinant DNA) ③重组DNA分子转入宿主细胞 ④筛选重组子 ⑤重组子的扩增和目的基因的分析 5.2 目的基因的来源 把DNA分子切割或连接成易于与载体连接的片段。 单酶切和多酶切； 完全酶切和部分酶切； DNA片段的回收。 5.4 DNA片段的体外重组 5.4.2 同源粘性末端间的连接 同尾酶连接时的“焊死”现象。 5.4.2 同源粘性末端间的连接 粘端连接需要避免的2个情况： 自身环化和两向连接。 解决办法： 定向克隆和酶切分析 同一种内切酶生产的粘性末端的连接 5.4.3 平端连接 平头末段连接的特点 平头末端连接的问