老年大鼠听性脑干核团及其谷氨酸脱羧酶的变化-耳鼻咽喉科学专业论文.docxVIP

郑州大学2003年硕士毕业论文 郑州大学2003年硕士毕业论文 老年大鼠听性脑于核团及其谷氨酸脱羧酶的变化 老年大鼠听性脑干核团及其谷氨酸脱羧酶的变化 研究生 蒋学范 导师 董雪蕾 郑州大学第三附属医院耳鼻咽喉科 郑州45 0052 摘要 目的：老年性聋是常见的老年性疾病，也是老年人群中最常见的听力障碍之一， 但其发病机制目前尚未完全明了。近年来的研究表明，老年人的听力损害是由于末梢 器官和脑干的变化同时起作用的。这两种变化都涉及到神经递质的变化，神经递质在 听觉传导中发挥着重要作用，听觉系统中兴奋性递质和抑制性递质的相互平衡可以保 证听觉信号的正确传入，递质一旦发生改变，必然会影响听觉信号的传入。y一氨基 丁酸(gamma—aminobutyric acid，GABA)是哺乳动物中枢神经系统中一种重要的抑制 性神经递质。在听觉系统中，GABA主要是通过与其相应的受体结合发挥神经抑制作 用，抑制内源性和外源性噪音，从而提高听力和言语辨别率。GABA由谷氨酸经a 脱羧而形成，而谷氨酸脱羧酶(glutamate decarboxylase，GAD)是GABA合成的限速酶， 中枢神经系统中的GAD有两种存在形式，即GAD65和GAD67。研究表明，听性脑干核 团中含有GABA和GAD免疫反应阳性神经元和神经纤维。生理状态下机体可合成一定 量的GABA，用于维持神经冲动的正常传导；然而，在病理情况下，许多因素可以影 响GAD的生成和活性，进而影响GABA的合成，造成神经冲动传导障碍。结合老年人 言语辨别率降低，对声刺激的抑制作用减弱，在嘈杂环境中听力下降的现象，推论听 性脑干核团中GABA的变化在老年性聋的发病机制中可能起一定作用。但目前人们对 老年性聋的研究主要集中在耳蜗，对听觉中枢的研究甚少，老年性聋时听性脑干核团 中GAD是否有变化，研究更少。 为了进一步探讨听性脑干核团及GABA在老年性聋发病机制中的作用，本课题采 用甲苯胺蓝染色和免疫组织化学技术观察D-半乳糖衰老大鼠昕性脑干核团及其 GAD65和GAD67的变化，并分析其原因，为临床预防和治疗老年性聋提供理论依据。 材料与方法：1．以大鼠为研究对象，将60只成年健康、耳廓反射灵敏的Wistar 郑卅I大学2003年硕士毕业论文 郑卅I大学2003年硕士毕业论文 老年大鼠听性脑干核团及其谷氨酸脱羧酶的变化 大鼠(河南省实验动物中心提供)随机分为两组：实验组和对照组，每组30只。实验 组每天腹腔注射D一半乳糖50mg／kg／d，连续6周，对照组每天腹腔注射同等量的生理 盐水，连续6周。2．各组动物均于用药前和用药后测试听性脑干反应(auditory brainstem response，ABR)阂值，I、III、V波潜伏期及I—III、III—V、I—V波问期。 3．各组动物于用药前和用药后分别采用黄嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥酸比色法测试 血清超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)的活力和丙二醛(MDA)的浓度。4． 动物开胸，经左心室用150—200ml生理盐水快速冲净血液，并用4％多聚甲醛磷酸缓 冲液(PH7．4)500ml缓慢灌注。随后开颅取脑置于上述缓冲液中，次日修剪标本，取 脑干入同样液体中固定1周，石蜡包埋，连续切片。每只大鼠选特定平面即耳蜗核， 上橄榄复合体，外侧丘系核和下丘核处的切片各四套。一套行甲苯胺蓝染色，两套用 SABC法进行GAD65和GAD67免疫组织化学染色，另一套做阴性对照。5．用HPIAS一1000 电子计算机图像分析系统进行图像分析，测定听性脑干核团GAD65和GAD67阳性反应 产物的平均灰度值，按此结果比较GAD含量的多少。6．实验数据经SPSSIO．0统计软 件进行统计学处理，采用t检验和相关分析，取a=0．05为显著性检验水准。 结果：1．对照组用药后ABR反应阈值，I、III、V波潜伏期及I—III、III—V、I—V 波间期无明显改变。实验组用药后ABR反应阈值明显提高，I、III、V波潜伏期明显 延长，I—III、III—V、I—V波间期亦明显延长。两组均值有显著性差异。2．对照组用 药后血清SOD活力、MDA浓度无明显变化，实验组用药后SOD活力明显下降，MDA浓 度明显提高。两组均值有显著性差别(PO．01)。3．甲苯胺蓝染色光镜下显示，实验 组大鼠脑干各听性核团神经细胞数目明显减少，胶质细胞增生，神经细胞肿胀，胞核 和胞浆邹缩，脂褐素沉积，尼氏体减少，胞浆内空泡形成，核膜不规则，毛细血管管 腔增多，内皮细胞增生肥大，管壁增厚。4．免疫组织化学结果显示实验组听性脑干各 核团GAD65和GAD67阳性反应物的分布区域与对照组相比无明显变化，但棕黄色颗粒 明显减轻，阳性细胞和阳性纤维数明显减少。图