山羊卵母细胞减数分裂进程及HX对其调控机理的研究-基础兽医学专业论文.docxVIP

马所峰 马所峰 摘 耍 2002年5月 摘要 目前胚胎工程技术研究和开发(如体外生产胚胎和体细胞克隆等)需要大量高质量 的成熟卵母细胞，但利用屠宰动物卵巢卵母细胞经过体外成熟培养而获取的卵母细胞质 量还远不如体内成熟卵母细胞，其原因一般认为是由于缺乏体内主卵泡阶段的获能作用。 因此，近年来人们开始探讨人工控制卵母细胞核成熟，以提高卵胞质成熟度．但是，有 关山羊卵母细胞的减数分裂进程及其调控均有待进～步的研究。本实验以随机屠絮山羊 卵巢为材料研究了山羊卵母细胞减数分裂的进程以及I-IX在这一过程中的调控作用。f结 ＼ 果表明： 、 l、山羊卵巢表面直径1．5-2．5nun以上卵泡的表面直径和实测直径具有显著相关性， 可以利用其表面直径对卵泡进行分类。 2、表面直径1．5—2．5nnn以上卵泡其卵母细胞已经达到最大直径(约130u m)，透明 带体积也不再增加：在此前的有腔卵泡阶段，二者均随着卵泡直径增加面增加。 3、不同直径卵泡卵母细胞其减数分裂能力不同：≤0．5mm直径卵泡卵母细胞未获得 恢复减数分裂的能力：0．8-i．2嘲直径卵泡卵母细胞可恢复减数分裂但只能发育到MI期； 这两组卵泡卵母细胞均未达到最大直径。1．5-2．5mm和3-5ram直径卵泡卵母细胞可恢复 减数分裂并发育到MII期(24 h时MII期比率分别为93％和91％)。 4、1．5-2．5ram直径卵泡卵母细胞的减数分裂进程为：O_4．2 h为GV期；4．2—9．0 h 为前中期I：9．0-15．6 h为MI期：15．6一18．4 h为后期-I和末期-I：18．4-24 h为MII期。 5、山苹卵泡液中含有0．45—1 19 mmol／L的次黄嘌岭(Hx)，其浓度随卵泡宜径增 加而下降。 6、HX对山羊卵母细胞减数分裂具有剂量依赖性的抑制作用．4mmol／L fD(效果最好 (6 h时GV比率为55％)：但HX对山羊卵母细胞减数分裂的抑制作用只能持续6 h，6．8 h 卵母细胞OV比率从58％迅速降低到32％，到24 h仍有21％的卵母细胞停留在GV期； 解除HX抑制作用后，卵母细胞可以恢复减数分裂并发育到MII期。 7、通过换渣证明HX抑制作用的下降不是因为I-IX降解，添加db--cAMP以及用HPLC 测量培养液中HX浓度变化证明，体外情况下可能是卵母细胞代谢HX而分泌cAMP到 培养液中，从而抑制山羊卵母细胞减数分裂。卵母细胞在培养4 h之前可以代谢HX并 产生抑制减数分裂的物质，4 h之后即不具备这种能力。 8、I-IX对卵母细胞成熟具有多方面的影响。I-IX存在情况下成熟到／viii期的卵母细 胞排出第一极体时同步化程度商，其孤雌活化能力高于正常成熟卵母细胞，HX作用24 h 组出现自发激活现象(自发活化比率55％)。、～、 关键词：卵母细胞，卵泡，减数分裂，次黄嘌岭，山羊 硕士学位论文 硕士学位论文 山羊卵母细胞减数分裂进程及HX对其调控机理的研究 东北农业大学 MEIOTIC PROGRESSIoN AND ITS CONrRoL BY HYPOXANn佃NE IN GOAT ooClrrES Abstract Techniques in embfyo technology(such as in vitro production of embryos and animal cloning)need large quantities of high quality oucym．But the quality of in vitro matured ooeytes from slaughtered ahimals is generally lower than that ofthe in vivo matuFl甜onertes．It is usually thought that the reason for tiffs poor quality in in vitro matured oucytes is the lack of capacitation during出e dominancy of follicular development in vivo．Therefore,people bcgifl to attempt to inhibit nuclear maturation ofoocytes，to improve oncyte quality．Few studies have been conducted St)far on