第十一章 薄层色谱.pptVIP

选择TLC分离条件的一般原则： 组分：极性大 吸附剂：极性小 展开剂：极性大 三、展开剂（流动相） 酸性组分——加酸，可防止拖尾现象 碱性组分——加碱，可防止拖尾现象 选择展开剂——采用试验的方法 常选择用混合溶剂作为展开剂 如何调节Rf值在0.15-0.85？ 通过调节展开剂的极性： 若Rf值都太小，则 展开剂的极性； 若Rf值都太大，则 展开剂的极性。 还可改变吸附剂的活性： 若Rf值都太小，则 吸附剂的活性； 若Rf值都太大，则 吸附剂的活性。 思考 增大 减小 减小 增大 §11-2 操作方法 一、制板 二、点样 三、展开 四、斑点定位 一、制板 薄层铺板的厚度及均匀性对样品的分离效果和Rf值的重复性影响极大 ，一般厚度以0.25mm为宜。 硬板的制备 1)载板； 2)匀浆的制备；3）制板；4）晾干；5）活化 (1)载板 多用玻璃板，也可用塑料膜和金属铝箔。 要求：表面光滑，平整清洁，没有划痕。用前先把玻璃板用洗液浸泡或用肥皂水洗净，再用水清洗干净，最好用95％乙醇擦一次。烘干备用。 规格根据载玻片的不同一般有4cm×20cm、10cm×20cm、20cm×20cm及2.5cm×7.5cm等几种 (2)匀浆的制备 1份吸附剂+3份黏合剂放在研钵中，向同一方向研磨，研磨至均一且无气泡，此时呈胶状物，色泽洁白为佳。为防止由于搅拌带入气泡，可加入少量的乙醇 （3）铺板 倾注法：将匀浆立即倾入玻璃板上，倾斜薄层板，使吸附剂流至薄层板一侧，待吸附剂蓄积一定量后，再反向倾斜薄层板，使吸附剂回流然后是另外两个方向，重复操作，然后再稍加振动，使载板薄层均匀。 （4）晾干： 自然晾干 （5）活化： 将晾干的板子放在烘箱中于105～110℃活化0.5～1h，取出，放入干燥器中，备用。一般硅胶活化1h，而氧化铝活化30min即可 二、点样 要求斑点集中，点样量适中 溶解固体样品的溶剂有挥发性，避免用水，否则易使斑点扩散；液体样品可直接点样。 点样位置距薄层底边约1.5-2.5cm处，采用多次点加法。 点样量应适中，原点直径宜为2-3mm。 点样工具：玻璃毛细管，微量注射器，自动点样器。 在同一薄板上，多个样品点的距离应大于1.5cm。 点样不能距边太近，避免边缘效应。 点样时间要短，避免薄板暴露在空气中时间过长而吸水降低活性。 边缘效应 ①定义：同一薄板的同一物质，在色谱展开过程中，靠边缘处斑点的Rf值与中心区域斑点的Rf值不等，此种现象称为边缘效应。 ②产生原因：色谱缸中混合展开剂蒸汽未达到饱和，溶剂在硅胶板的边缘极性较大。 边缘效应 ③减少边缘效应的办法 色谱缸密闭性要好，展开剂应先饱和后再展开； 点样尽量靠中心，不要离边缘太近。 点样 三、展开 饱和： 将薄层板样点一端放入缸内，注意切勿使样点浸入展开剂中，密闭, 先让缸内溶剂蒸气饱和5～10min . 开始展开： 展开剂前沿上升到样点上方8～10cm时取出薄层板，放平，铅笔标明溶剂前沿位置 展开 四、显色（斑点定位） 1.直接观察:有色斑点 2.有些组分在紫外光照射下产生荧光，可在紫外灯下用铅笔将组分斑点描绘出来。 3.化学显色:常用的方法有喷洒显色剂、碘蒸气熏或氨水熏等 TLC的特点 welcome to use these PowerPoint templates, New Content design, 10 years experience 1.分离效能强； 2.灵敏度高； 3.展开快；可以同时展开多个样品； 4.预处理简单； 5.设备简单，操作方便； 6.上样量比较大 ，可点成条状。 §11-3 定性和定量方法 一、定性方法 测出斑点的Rf值，与同板上的已知对照品的Rf值对比， Rf值一致，即可初步定性该斑点与对照品为同一物质。 然后更换几种展开系统，如Rf值仍然一致，则可得到较为肯定的定性结论。 这种定性方法适用于已知范围的未知物。 由于Rf值重现性差，因此也常采用相对比移值Rs来定性 作业 P129-130 计算题1、2 在吸附薄层色谱法中，主要是以吸附剂为固定相，吸附剂对极性不同的物质吸附能力不同 在薄层色谱法中，随着溶剂展开，有的组分跑得比较快，有的跑得慢。这个时候要用什么来形容这种分离行为的差别呢？那就引入比移值的概念。我们常常用比移值来表示各组分在色谱中的分离情况或者说保留行为。 在薄层色谱法中，很多实验条件都会影响到组分的分离情况。比如温度、湿度、展开剂的比例、展开缸的饱和情况、薄层板的厚度和均匀度等等都会影响Rf值。因此需要采用相对比移值来代替比绝对比移值，也就是要把样品和对照品同时同样条件进行实验，