课件：体内药物分析常用生物样品处理方法和方法学验证.ppt

* 7.稀释完整性 Dilution integrity 考察方法：将5倍于ULOQ浓度的QC样品，使用空白基质连 续稀释。每个浓度单独稀释，至少测定5份样品； 结果要求：每个稀释浓度的准确度偏差和精密度应在15% 之内。 * 8.稳定性 Stability 8.1分析物和内标的标准贮备液(Stock)和标准工作液(Working)的稳定性 8.2样品冰冻/融三次解稳定性，Freeze/Thaw，F/T 8.3样品融解后短期稳定性，Thawed 8.4样品冰冻的长期稳定性，Long-term 8.5处理后样品溶液在进样器中的稳定性 * 稳定性考察内容和操作主要是根据样品的实际储存条件设计，所考察的冻/融循环数和储存时间均应相等或超过实际样品。 标准溶液稳定性考察应将stock solution稀释至合适的浓度范围之内，结果新/旧两份标准溶液的Diff%值应在±5%之内。 样品的稳定性应使用Low和High浓度的QC样品进行考察，每个浓度测定三份，结果的均值与理论浓度的DEV%值应在±15%之内。 * 9.基质效应 Matrix effect 考察方法：在LQC和HQC两个浓度基础上，取至少6份不 同来源的空白生物基质，提取后加入标准和内 标溶液做为考察组；对照组使用不含有基质的 纯溶液，浓度相当于加入的LQC和HQC的浓度； 计算基质效应因子MF和内标校正的MF。 结果要求：内标校正的MF的CV%值应不大于15%。 * * ①绝对基质效应 考察方法：a组：使用基质配制三个浓度的QC样品，各 测定三份； b组：使用溶剂配制三个浓度的QC样品，各 测定三份； 结果要求：绝对基质效应=响应值a/响应值b*100%； 各浓度质控的分析物和内标的绝对基质效应均 值在85% -115%之间，相对标准偏差小于15%。 目前国内的主流的基质效应考察方法： * ②相对基质效应 考察方法：使用6份不同来源的生物基质，测定LLOQ，每 份基质重复测定3份； 结果要求：准确度应在80% - 120%之间；每个基质至少有 2个符合要求算合格；6批基质中，至少有5批 合格算通过。 * 提取回收率 Recovery 考察方法：a组：测定三个浓度的QC样品各六份，流动 相复溶； b组：使用等量空白基质代替QC样品，共测 定18份，提取后吹干，使用等体积的折算后 相当于QC浓度的溶液复溶； 结果要求：计算3个浓度的QC样品的CV%值应小于15%。 * 举例：地西泮HPLC-MS/MS分析方法验证报告 * 样品分析中应注意的问题： 1.实验中的样品编号问题 2.分析批的概念 3.色谱响应值计算问题 * THANK YOU SUCCESS * * 可编辑 超速离心法 平衡透析法 最主要的应用在测定血浆中游离的药物浓度和药物的血浆蛋白结合率。 * 药物在体内吸收，需经跨膜转运，所以多数药物具有一定的脂溶性，而生物样品中大多数内源性杂质是强极性的水溶性物质，所以可以根据药物分子与基质之间极性的差异，使用适当的有机溶剂提取药物，有机溶剂提取可一次除去大部分杂质。 * 2.液液萃取法 LLE 有机溶剂应选择稳定，易挥发，低毒性，不与水相混溶的溶剂。常用的有机溶剂有：乙醚、乙酸乙酯、正己烷、叔丁基甲醚和氯仿等。 应用本法时需要考虑所选有机溶剂的特性、药物的特点、有机溶剂相和水相的体积比及水相的pH值等。 酸性药物的解离：AH + H2O A- + H+ 碱性药物的解离：B + H2O B+ + OH- 药物的解离常数pKa为药物解离50%时溶液的pH值。 * 药物的提取程度主要取决于水相的pH值。对于碱性药物，最佳pH值要高于pKa 1-2个单位；对于酸性药物来说，则要低于pKa值1-2个单位；这样就可使90%的药物以非电离的形式存在从而更易溶于有机溶剂中。 常用来调节p