利用原生质体技术选育聚β羟基丁酸高产菌株和发酵条件的研究-微生物学专业论文.docxVIP

摘要PHB在自然界中是作为微生物自身能量的储存物质而存在于细胞内，除具 摘要 PHB在自然界中是作为微生物自身能量的储存物质而存在于细胞内，除具 有与化学合成塑料聚丙烯相似性外，还具有生物相容性和生物可降解性。在“白 色污染”日益严重的今天，PHB作为生物降解塑料的原料倍受瞩目，成为国内 外研究的热点。但是，目前发酵生产成本高，价格是普通塑料的许多倍，不利 于工业化生产。解决上述问题的主要途径包括：(1)开发优良的菌种，使其高 产PHB；(2)利用价廉的原料，以降低原料成本；(3)优化PHB的合成过程， 以便于操作和降低原料消耗；(4)开发合适的提取工艺，是提取成本降到最低 限度。其中，高产菌种的选育是其研究的关键部分。 目的：选育PHB高产菌株，提高PHB产量。方法：实验选取两株在形态上和 生理特性上差别较大的产PHB菌株作为出发菌株，进行原生质体融合和激光诱 变，在此基础上对其摇瓶发酵条件进行优化。结果：用溶菌酶水解细胞壁，其原 生质体形成率S一8为78，0％．Q一72为96．O％；再生率S一8为19．5％， Q-72为31．4％。 然后，用促融剂聚乙二醇(P96)使两亲本菌株进行融合，获得融合子8株。融合 子R_7的PHB产量明显提高，遗传性稳定。同时经激光诱变得到正突变菌株6株， 其中：突变菌株Y一17在发酵过程中能够积累4．869／L的PHB，比出发菌株S一8相比， 其PHB的提高率为67，o％。在最适条件下，Y一17菌株能够积累PHB达5．829／L。采用 补料发酵实验，定时流加碳源、氮源和H：02，明显提高了PHB含量，EI]PHB达到10．93 g／L。结论：突变菌株Y～17产PHB能力强，各种性状也接近工业生产的要求，可作 为良好的发酵菌株应用于发酵工业。 关键词：聚13羟基丁酸(PHB)，原生质体融合，激光诱变，发酵，H：O： AbstractPoly—B-hydroxybutyrate(PHB)is Abstract Poly—B-hydroxybutyrate(PHB)is a microbial polyester which is accumulated in certain bacteria．It crystallizes to form a polymer with similar properties to polypropyiene．PHB is also biodegradable and biocompatibile．PHB as raw material of bioplatics is investigative hot point recently．But the high fermentation cost is orle of me disad—vantage facters in the industrialization production．The main solution to the above problems includes：(1)breed the high-yield strain；(2)use the low-price raw material；(3)optimize the process of PHB synthesize；(4)develop the proper distill method． Objective：Breed selectively the high-yield strain to increase the yield of PHB， Methods：selecting two strains with great difference in physiology characteristics and appearances as starting strains；proceeding the protoplasm fusion and laser treatment．On the condition，the condition of shaking—flask was optimized．Result： By taking S-8 and Q一72 aS starting strains，the two parental strains were hydrolyzed by lyticase．The rate of protoplast formation of strain S-8 Was 78．0％while the rate of regeneration 1 9．5％：the rate of protoplast formation of strain Q一72 was 96．O％ while the rate of