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安徽大学生命科学学院 第五章 病毒的遗传分析 本章学时数：3学时 本章重点： 烈性噬菌体的遗传体制 温和噬菌体的遗传体制 本章主要内容 病毒与噬菌体 噬菌体的互补试验 噬菌体的重组实验 烈性噬菌体的杂交机制 温和噬菌体的遗传机制 环状排列和末端重复 病毒概述 从寄主范围分：？ 1.动物病毒 2.植物病毒 3.细菌病毒（噬菌体） 噬菌体 本章主要以噬菌体的遗传为例介绍病毒的遗传体制 噬菌体是遗传学研究的好材料 子代多，繁殖快，有利于观察到罕见的遗传现象。 基因组小 有多种突变类型 在遗传学发展史中具有重要地位 噬菌体 phage T4噬菌体感染细菌细胞 证明DNA是遗传物质的实验 噬菌体的繁殖和感染周期 噬菌体的繁殖和感染周期 溶源性及其遗传基础 1.溶源性Lysogeny：细菌受温和噬菌体侵染后，并不裂解的现象。 2.溶源性细菌Lysogenic bacteria 具有溶源性的细菌。 3.原噬菌体prophage：存在于细菌细胞中的无感染能力的噬菌体（实际上是核酸）。可以以两种方式存在，游离（P1）或整合（? ）。理化因子处理可诱导原噬菌体的释放，裂解细胞。 Phage的突变型 条件致死突变（phage） 限制条件与许可条件 温度敏感突变ts/cs 抑制因子敏感突变sus 无义突变和无义抑制基因（宿主菌） Nonsense mutation多肽链提前终止失去活性 无义抑制基因 tRNA基因突变 噬菌斑Plaque 在长满细菌的平板上由于烈性噬菌体感染而形成的透明区称为噬菌斑。 一个噬菌斑含有107~108个噬菌体。 由于噬菌体的基因型不同，噬菌斑有大有小，边缘清楚或模糊，存在宿主专一性。 所以，噬菌斑是观察噬菌体表型的重要性状标志 噬菌体的互补试验 ?x174条件致死突变的互补测验 T4突变型的互补测验 ?x174条件致死突变的互补测验 ?x174 双重感染可以产生子代噬菌体，表明突变可以互补，属于不同的顺反子。 39个条件致死突变分别属于8个顺反子 T4突变型的互补测验 Edgar 和Epstein在1960年首次发现条件致死突变型。 体外互补 T4噬菌体的装配是有程序性的途径 噬菌体突变的重组实验 噬菌体的遗传分析 T2噬菌体的连锁图 不同的快速溶菌突变型在表型上是不同的，记作：ra、rb、rc，用rxh+与r+h-杂交，可以算出rarbrc分别与h的连锁图距。 ra –h为24，rb-h为12.3，rc-h为1.6 存在四种可能的排列： 多次试验表明，2和4都正确 表明：T2噬菌体的连锁图 是环状的 T2噬菌体的连锁图 T4突变型的三点测交 T4突变型的三点测交 m 12.9 r 20.8 tu ?x174突变型的两点和三点测交 两点测交 用2种不同的sus突变噬菌体感染su+细菌 用带合适su+基因的宿主菌可检测子代噬菌体总数 用su-细菌检测重组的野生子代噬菌体 计算重组频率 ?x174突变型的两点和三点测交 三点测交 选择两个标记的野生型（amA tsC×amB） 许可条件下在su-细菌中选择am突变的野生重组子 限制条件下分析重组子中tsC与tsC+的比例 推测3个基因排列顺序 利用非选择标记tsC确定三因子的顺序 烈性噬菌体的杂交体制 不同于真核生物的杂交机制 亲代提供的遗传物质的数量影响重组子的类型多少 重组发生在噬菌体DNA复制以后 不同基因型发生多次交换 重组频率随宿主细胞裂解时间延长而增加 烈性噬菌体的杂交 噬菌体杂交应注意 控制亲代phage的量 控制允许发生复制和重组的时间 ?噬菌体基因组与? 原噬菌体 ?噬菌体基因组 噬菌斑形成必需的基因，用大写字母表示 噬菌斑形成非必需的基因，用小写字母或希腊字母表示 必需基因 A.W.B.C.D.E.F 头部必需 Z.U.V.G.T.H.M.L.K.I.J 尾部必需 O.P为DNA复制必需 S.R为裂解必需 N.Q为正调节基因 ?噬菌体基因组 噬菌斑非必需基因 att为phage附着区 int. xis为专一位置重组必需 cI. cII. cIII为溶源化必需 exo为核酸外切酶基因 red为重组基因 49000个核苷酸对的线状DNA分子，可以失去22%而不影响噬菌斑形成，但不能重组或溶源化。 ?噬菌体基因组特点 功能相关基因聚集在一起 结构基因和其编码的蛋白质作用的位点也相邻，如int和xis位于att旁边 具有12个核苷酸组成的单链粘性末端。在宿主细胞中形成环状。 ? 原噬菌体与合子诱导 ? 原噬菌体是整合在细菌染色体上的 1953，Lederberg等发现? 原噬菌体和gal基因一起分离和重组 1955，Lennox证明? 原噬菌