德国小蠊酸性磷酸酯酶测定条件的方法研究.docVIP

［目的］探索德国小? (Blattella germanica)酸性磷酸酯酶的最佳测定条件。［方法］采 用二次回归通用旋转组合设计方法建立德国小嫌酸性 磷酸酯酶测定中缓冲液pH值、反应温度、水浴时间、 底物浓度等测定条件的数学模型，根据该模型寻求测 定条件的最优组合。［结果］本次试验得到回归方程 y#710; = 0.181 57 - 0.012 08x1 + 0.028 75x2 + 0.025 58x3 - 0.003 83x4 + 0.001x1 x2 - 0.006 13x1 x3 + 0.000 625x1 x4 + 0.010 63x2 x3 + 0.000 125x2 x4 + 0.000 25x3 x4 - 0.008 37x12 - 0.002 62x22 - 0.004 75x32 - 0.009 87x42 (R2 = 0.915 6, Se = 0.000 612 57)O 方程的失拟 性检验F = 3.59 0.05)；回归方程的显著性检验F二 12.39 F0.01 (14, 16) =3.45 (P 关键词德国小嫌；酸性磷酸酯酶；二次通用旋 转组合设计 Methodological Research of Testing the Acid Phosphatase of Blattella GermanicaCAI Hui-zhen, SHEN Xiao?bing*(School of Public Health, Southeast University, Nanjing 210009, China) Abstract [Objective] To find the best testing condition of the acid phosphatase of Blattella germanica. [Methods] Quadratic general rotary unitized design was used to study the relati on ship betwee n buffer pH, temperature, reaction time, substrate concentration and absorbe nee, and to find the best combi nation of those test conditions? [Results] For the result regression equation we got, y#710; = 0.181 57 ? 0.012 08x1 + 0.028 75x2 + 0.025 58x3 - 0.003 83x4 + 0.001x1 x2 - 0.006 13x1 x3 + 0.000 625x1 x4 + 0.010 63x2 x3 + 0.000 125x2 x4 + 0.000 25x3 x4 - 0.008 37x12 - 0.002 62x22 - 0.004 75x32 - 0.009 87x42 (R2 = 0.915 6, Se = 0.000 612 57) . There has no missing critical factors for the equation (F 二 3.59 0.05) and there was statistically significance (F = 12.39 F0.01 (14, 16) =3.45, P 因此，n二mc + 2p + mo,且这n个点 是分布在3个半径不相等的球面上，其中me个点分 布在半径为PC二的球面上；2p个点分布在半径为P 丫 =Y的球面上;mo个点分布在半径为P 0= 0的球面上。 本次试验共研究了4个因子，根据二次回归通用 旋转组合设计试验的参数设计，本次试验的参数如下: p = 4 p = 4； me = 16； y =2； mo = 7 (由参数设计表查得); n 二 31o 1.2.2试验因素转换参照二次回归通用旋转组合 设计［7-12］,将本次试验因子转化为规范变量的因素 水平，见表lo 1.3试验方法和安排 取室内饲养的德国小嫌雄虫若干只，取其中肠, 加0.1 mmol/L冰冷醋酸缓冲液少许（pH值依表1而定） 混合匀浆，于4 °C、8 000 r/min,离心15 min,取上 清液为酶源，待测。 根据4因子5水平二次回归通用旋转组合设计结 构矩阵［11, 12］,对31个组合进行试验，共重复3 次，每次重复中各组合测2个样品，每样品测3次吸 光度值。具体试验安排见表2o 2结果 2.1数学模型的建立 应用国际通用软件包SAS的REG过程拟合回归模 型［9, 11］, NLP过程求最优化配