昆虫病原线虫共生菌中plu4436基因的克隆与表达-农业昆虫与害虫防治专业论文.docxVIP

Title：Cloning Title：Cloning and Expression of plu4436 gene from Symbiotic Bacteria of Entomopathogenic nemotodes Major：Agricutural insects and pests control Nalne：Shi Wei Supervisor：Qiu Lihong，Ph．D． Abstract Entomopathogenic nematodes(EN)have been used as biological control agent． Bacteria of the genera Xenorhabdus and Photorhabdus have a mutual symbiotic relationship with entomopathogenic nematodes of the families Steinemematidae and Heterorhabditidae，respectively．The bacteria play an important role in the pathogenicity of the EN and bacteria complex to insect pests．It was found that some toxins of EN symbiotic bacteria could effectively kill a wide range of insects．Genes encoding these toxins therefore become potential alternatives of toxin genes from Bacillus thuringiensis for the development of novel transgenic insect．resistant plants． In the present study,plu4436 gene was obtained by PCR amplification from Photorhabdus luminescenes TT01．It was ligased to plasmid pQE30，and then expressed in E coli．The Plu4436 was purified with Ni．NTA agarose．The oral toxicity of the resulted Plu4436 tO the neonate of Helicoverpa armigera，Spodoptera exigua，Spodoptera litura and Trichoplusia ni was tested．’Fhe results showed that the Plu4436 have no oral toxicity to all of the insects tested． Keyword：entomopathOgenic nematodes，symbiotic bacteria， plu4436 gent，clone and expression 11 石微 石微 中山大学硕士学位论文 日IJ舌 昆虫病原线虫．共生菌复合体由于具有杀虫谱广、主动搜索害虫的能力，已 成为生物防治的方法之一。现已描述的共生菌有两个属：致病杆菌属 (Xenorhabdus)和发光杆菌属(Photorhabdus)。当线虫主动侵染昆虫后，其肠 道中的共生菌被释放入昆虫血腔，共生菌在血腔中大量繁殖，释放毒素，导致昆 虫迅速死亡(ffrench．Constantetal．，2002)。 由于发光杆菌属和致病杆菌属共生菌不能在土壤或水中长时间生存，所以它 们不能直接作为生物杀虫剂使用，但是可以将它们的毒素基因转入其他细菌、微 生物或植物中开发利用。近年来在EN共生菌有生物活性代谢产物，如抗生素， 杀虫毒素蛋白等的基础和开发研究方面取得的突破性进展也引起了广泛的重视， 成为另一研究热点。自从1998年Bowen等在Science上报道了从EN共生菌中 发现了多个类型的蛋白毒素以来(Bowen etal．，1998b)，现己从EN共生菌中发现 了多个类型的蛋白毒素，不同类型的蛋白毒素的杀虫谱不同，杀虫机理也不同。 2003年完成的共生菌只luminescens TI01菌株的全基因组测序结果显示，该 菌株中含有8类至少40个毒素基因，是目前已完成全基因组测序的细菌中拥有 杀虫毒索基因种类和数量最多的菌株(Dcchaud etaL，2003)。 目前，关于共生菌基因组和后基因组的