粒细胞集落刺激因子受体基因多态性与系统性红斑狼疮易感性、狼疮肾炎相关性的分析-内科学专业论文.docxVIP

中文摘要 中文摘要 前 言 f系统性红斑狼疮(SLE)是一种自身免疫性结缔组织病，流行 病学研究认为遗传因素在SLE发病过程中起重要作用．与SLE易 感性相关的基因一般都与病程中的免疫环节有关^ 在SLE病人中性粒细胞集落刺激因子(G—CSF)的致炎作用 得到充分重视，已有G—CSF引起血管炎的报道。G—CSF还能调 节免疫活性细胞的功能，促使T细胞向Th2表型转化；tk能促进B 淋巴细胞的增生和免疫球蛋白产量增加；能以自／旁分泌方式使正 常的T、B淋巴细胞，B淋巴细胞白血病细胞免于凋亡，G—CSF与 肾炎(包括LN)、蛋白尿间可能存在相关关系。G—CSF可能广泛 地参与了免疫炎症性疾病，包括SLE、LN的发病过程。有证据表 明G—CSF—R可能也存在异常并参与了SLE发病。在NZV矿X NZB F。鼠中发现G—CSF—R基因与鼠SLE易感性相关及该受体 基因的异常表达。基于以上研究基础，我们利用PCR—SSCP方法 进行了G—CSF—R单核苷酸多态性与SLE易感性、LN相关性的 研究。 f材料和方法 t 1．实验试剂、材料及仪器 PCR反应体系、Taq酶、引物，Tris碱及聚丙烯酰胺等；离心 机、PE9600 PCR扩增仪、琼脂糖凝胶及聚丙烯酰胺凝胶电泳槽。 2．研究对象 符合1982年美国风湿病学会诊断标准的SLE 144例，其中女 ．1· 性131例，男性13例，年龄为12～69岁。正常对照组：489名健康 性131例，男性13例，年龄为12～69岁。正常对照组：489名健康 献血员，均符合卫生部制定的“供血健康检查标准”，其中女性435 例，男性54例，与SLE组年龄相当。分别符合各自临床诊断标准 的其它免疫性疾病85例。原发性肾小球肾炎28例。 3．临床及实验室资料 来源于我院病例记载和实验室化验结果。 4．实验方法 4．1标本采集 4．2血浆分离及白细胞提取 4．3饱和酚一氯仿法提取DNA 4．4测序 4．5全部试验对象DNA样品PCR反应 根据测序结果设计新的引物以进行热启动PCR反应；用2％ 琼脂糖凝胶电泳检测PCR反应产物。 4。6 G—CSF—R扩增片段的单链构像多态性(SSCP)分析 5．以上统计分析采用SPSS软件 结 果 1．G—CSF—R基因第5内含子区域核苷酸(nt)9606位点存 在单核苷酸多态性。测序结果提示共有三种基因型：A．A／G杂 合子型，B．A／A纯合子型，C．G／G纯合子型。 2．SLE组与对照组比较，各基因型分布构成的差别有统计学 意义，X2=14．431，P=0．001。SLE病人中A／G基因型的频率明 显高于对照组(P=O．002)，A／A基因型的频率明显低予对照组(P =0．0001)，丽G／G基因型的频率在两组间无显著差异(P=0． 157)：A和G等位基因的阳性率在两组问的差异有显著性(P=O． 001)。A等位基因的频率明显低于对照组，G等位基因的频率明 ·2· 显高于对照组。3．各基因型在各l艋床表现，各临床检验结果中的阳性率均无 显高于对照组。 3．各基因型在各l艋床表现，各临床检验结果中的阳性率均无 显著差异(PO．05)。 4．Kendall’s相关分析提示A／A基因型与蛋白尿程度相关(r_ =O．249，P=0．049)。 讨 论 本研究首次发现中国北方汉族人G—CSF—R基因第5内含 子9606位点存在单核苷酸多态性(SNP)，并存在3种基因型9606 A／G，9606 A／A，9606G／G。统计学资料提示该SNP与SLE易感性 相关，G—CSF—R基因可能是SLE的易感基因。本研究结果与外 国学者的结论相符合。G—CSF—R可能存在数目、结构、信号传 导方面的异常，在SLE发病中有重要作用。G—CSF的所有功能 都是通过其与受体结合发挥出来的，所以研究G—CSF—R异常表 达在SLE发病中的作用，就要研究G—CSF与SLE的关系。在 SLE病人中G—CSF的致炎作用得到充分重视。一般认为下列因 素可能是G—CSF引起狼疮发作，血管炎发生和狼疮脑病加重的 原因：(1)G—CSF诱导中性粒细胞迅速增多，多形核白细胞(PMN) 的代谢和功能上调。其中粒细胞的吞噬作用增强明显。(2)免疫复 合物和补体能激活PMN，在这样的背景下，G—CSF增加PMN的 数量能导致血管炎的发作。(3)G—CSF—R在调节PMN活性方面 有重要作用，受体异常能够引起中性粒细胞活性的改变。另外，G —CSF改变了Thl／Th2平衡的方向，能直接作用于B淋巴细胞上 促使免疫球蛋白产量增加。总之，G—CSF对体液免疫的促进可 能参与了SLE的发病，这与我们的实验结果相符合。 然而有许多报道认为SLE的发病是由Thl型细胞主导的。 出现这种不一致的原因可能是(1)实验方法和细胞类型