报送科室输血科-宁夏医科大学总医院图书馆.docVIP

PAGE PAGE 41 报送科室：输血科 图书馆推荐最新文献信息 （2016年12月1 1.随机噬菌体肽库筛选血型D抗原模拟多肽方案的建立及初步验证 目的 探讨随机噬菌体十二肽库筛选血型D抗原模拟多肽的影响因素,以建立最佳筛选方案.方法 对比洗脱时间分别为4、8、12、16和30 min的洗脱液滴度;3轮清洗缓冲液中Tween 20浓度分别为0.1％、0.2％、0.5％和分别为0.1％、0.5％、0.5％时每轮淘洗的投入/产出比,以及3轮封闭缓冲液均为0.5％ BSA和分别为0.5％ BSA、1％明胶、5％脱脂奶时每轮淘洗的投入/产出比,以分析筛选效果,得出最佳筛选方案.对采用最佳筛选方案筛选得到的阳性克隆测定其DNA序列和做抗体竞争抑制试验检测D抗原模拟表位.结果 洗脱8 min时洗脱液滴度为(2.3t±0.25)×106 pfu/mL,洗脱4、12、16和30 min时的洗脱液滴度与之相比明显下降(P＜0.01).当洗脱时间为8 min且3轮封闭缓冲液均为0.5％ BSA时,3轮淘洗清洗缓冲液Tween 20浓度分别为0.1％、0.5％、0.5％时投入/产出比分别为1.69×107、4.95×105、9.58×102,与清洗缓冲液Tween 20浓度分别为0.1％、0.2％、0.5％时投入/产出比分别为2.70×107 、4.57 × 105、1.14×103相比,对筛选效果影响不大.当洗脱时间为8 min且3轮淘洗清洗缓冲液Tween 20浓度分别为0.1％、0.5％、0.5％时,3轮封闭缓冲液分别为0.5％BSA、1％明胶、5％脱脂奶时投入/产出比分别为1.93×107、6.44×103、6.23×101,明显优于3轮淘洗封闭缓冲液均为0.5％ BSA时的投入/产出比(分别为1.94×10 7、1.66 × 105、8.23×102).通过优化方案筛选得到1个抑制率约为50％的十二肽序列“VHWDFRQW-WQPS.结论 洗脱时间、清洗缓冲液成分以及封闭缓冲液类型对筛选效率有一定影响.洗脱时间为8 min,3轮淘洗的清洗缓冲液Tween 20浓度分别为0.1％、0.5％、0.5％和3轮淘洗的封闭缓冲液分别为0.5％ BSA、1％明胶、5％脱脂奶粉时,筛选效果较优,可获得较理想的血型D抗原模拟多肽. 作 者 吴凡(汕头大学医学院微生物学与免疫学教研室,广东汕头515041深圳市血液中心Rh血型系统基础与临床研究关键技术攻关合作组)；? 庄乃保? (深圳市血液中心)；?张印则(深圳市血液中心Rh血型系统基础与临床研究关键技术攻关合作组)；徐华(陕西省血液中心Rh血型系统基础与临床研究关键技术攻关合作组)；周华友(南方医科大学南方医院Rh血型系统基础与临床研究关键技术攻关合作组)；? 李康生? (汕头大学医学院微生物学与免疫学教研室,广东汕头,515041)； 刊 名 中国输血杂志?? 2016年29卷08期?775-779页?? 英文期刊名 Chinese Journal of Blood Transfusion 关键词 噬菌体肽库? RhD抗原? 筛选效率? 洗脱时间? 清洗缓冲液? 封闭缓冲液? phage display peptide library? RhD antigen screening efficiency? elution time? washing buffer? blocking buffer 分类号 R457.1+1? Q782 栏目名称 Rh血型系统基础与临床研究专题 2.RhD mRNA剪接体全长外显子序列扩增技术的应用 目的 探讨建立的RhD mRNA剪接体多态性检测技术的有效性与实用性.方法 采用设计的两对引物扩增全长RhD mRNA外显子,完全避开RHCE基因的干扰,特异性扩增并分析了随机选取的非血缘关系50例标本的RhDmRNA剪接情况.结果 两对引物能扩增RhD mRNA剪接体的全长外显子基因并分析出RHD基因剪接体的多态性,扩增出4种剪接体的特异性:exon-1-3扩增产物:415 bp;exon-3-10扩增产物均由3种不同组合构成:产物一:约880 bp,产物二:约750 bp;产物三:约550 bp.50例标本:exon-1-3扩增产物:全部无缺失;exon-3-10扩增产物:带1无缺失,带2缺exon-7的占总标本27例、缺exon-7,8的占总标本6例、缺exon-8,9的占总标本12例、缺exon-7,9的占总标本5例,带3全部缺exon-7,8,9.结论 建立的RhD mRNA剪接体多态性检测技术可以准确扩增RhDmRNA全长基因,并有效分析该基因剪接体的多态性. 作 者