柳州市吸毒者HIV1病毒流行株34例检测分析.docVIP

柳州市吸毒者HIV-1病毒流行株34例检测分析 韦启后 陈柳军 刘鑫 康仕勤 杨振兴(柳州市疾病预防控制中心广西柳州 545007) 【中图分类号】R446【文献标识码]A【文章编号】1672-5085 (2010)30-0167-02 【摘要】 目的了解流行于柳州市吸毒者艾滋病病毒HIV?1毒株的亚型及各种 亚型的分布特点。方法 对34例HIV感染者进行详细的流行病学调查，并采集 外周静脉防凝血，提取前病毒DNA进行体外扩增，获得包膜蛋白(env).核心蛋 白(gag), tat区基因的核酸片段，并对各基因区核昔酸进行测定和分析。结果发 现在所有目标人群中共存在B、C2种亚型以及CRF07-BC (44.12%)和 CRF01-AE(55.88%)2种重组毒株。结论 柳州市HIV-1亚型以B、C为主,重组 毒株以CRF07-BC和CRF01-AE几乎各占一半，柳州市HIV-1亚型比较单一,控制 柳州市HIV-1亚型的多样性，做好防艾任重而道远。 【关键词】人免疫缺陷病毒亚型序列分析流行病学分子 人类免疫缺陷病毒I型(HIV-1)由于其高度变异性,存在多种不同类型。 HIV-1中的M组为全球流行毒株，包括A、B、C、D、F、G、H、J和K9种亚型及 不同亚型和同一亚型不同毒株间的基因重组产牛的CRF01?CRF14等流行重组 形式(circulating recombinant forms, CRFs)[l]o不同型或亚型HIV的易感性呈现一 定的差异性，且不同亚型HIV的流行传播具有一定的地区性分布及人群分布特点。 我国第一次分子流行病学调查共发现四种艾滋病病毒(HIV)亚型和一种重组毒 株[2],目前我国已报道确定的流行毒株有A、B、Brsquo;、C、D、F六种亚型⑶4] 和三种重组毒株，即CRF01-AE和两种不同的BC嵌合型，其中两种B/C重组株为 中国所特有。从2007年起我们对柳州市HIV?1感染者和患者进行了连续的分子 牛物学监测，为柳州市艾滋病的预防和治疗提供依据。 1对象与方法 1.1对象与样品：2006年1月至2006年12月在全市采集经静脉吸毒感 染HIV的34例感染者的静脉血，经酶联免疫吸附试验ELISA初筛和免疫印迹WB 确认的HIV阳性人群作为研究对象。所有调查对象经知情同意后根据统一调查 表由通过培训的调查员收集血样和详细的流行病学资料。每例对象采集静脉血 3?5 ml,EDTA防凝0.15%,分离血细胞，用PBS对倍稀释，分装厂70°C冻存备用。 1.2主要调查内容:包括HIV感染者的性别、年龄、职业、家庭住址、 婚否、配偶和子女的感染状况、危险因素等。 1.3前病毒DNA的提取:利用研究对象的外周血单个核细胞，提取HIV?1 前病毒DNA,使用QIAGEN公司DNA Blood Mini Kit,操作步骤按说明书进行。 1.4引物：分别利用多对引物进行env. gag. Rt3个区基因片段的扩增 和扩增产物的测序，序列见表lo 1.5巢式聚合酶链反应nPCR方法:所有反应均采用30mu;l反应体系。 env 区反应条件如下:第一轮,94 °Clmin、55 °Clmin、72 °C90s3 个循环,94 °C 15 s、55 °C45s、72 °Clmin32 个循环,72 °C5min;第二轮,94 °C2 min 55 °C 45 s、72 °C 90 si 个循环,94 °C30s、55 °C30s、72 °C 1 min 30 个循环,72 °C 10 mino gag 区反应条件为:第一轮,94 °C5 min 52°C1 min^ 72°C2.5 min 1 个循 环,94°C30 52°C30s72°C90s30 个循环,72°C 10 min;第二轮,94°C2min、50°C 50s、72°C90sl 个循环,94°C30s 50°C30s、72°Clmin35 个循环,72°C10min。 Rt 区反应条件为:第一轮,94°C5min 53°Clmin、72°C3 min 1 个循环,94°C30s、 53°C40s、72°C2min30 个循环,72°C10mino 第二轮?94°C3 min 53°C50s 72°C 3 min 1 个循环,94°C30s、53°C30s 72°C70s30 个循环,72°C10min。 1.6 PCR产物的纯化:PCR产物经1%琼脂糖凝胶电泳，与标准对照判定无 误后，再用2 %的琼脂糖凝胶电泳进行浓缩，切下特异扩增条带，用Qiaegen公司的 Qiaex试剂盒进行扩增产物的纯化，冋收所得DNA溶于10mmolTris-HCI,pH8.7,M经 琼脂糖凝胶电泳与分子量标准比较，估算核酸浓度。 1.7核昔酸序列测定:根据PCR引物不同，