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沙门菌检测技术的进展 冼桂江 【摘 要】 近年来，随着分子生物学技术，免疫学技术及其他新的检测技 术的应用，沙门菌的检测方法，打破了传统分离培养的单一方法。木文对目前 各种沙门菌的检测技术进行了系统的概述。 【关键词】沙门菌；检测技术；进展 沙门菌在自然界中分布广泛，是一种重要的人畜共患病原菌。不但能引起家 畜、家禽及其他动物发牛感染,而且能通过污染食物导致人的食物中毒。在世界 各国的各类细菌性食物中毒中，以沙门菌引起的在英国为首位，在美国为第二位。 在欧洲，每年有超过16万人感染沙门菌【1】；在美国每年有140万人感染沙门 菌【2】；在我国，由沙门菌引起的食源性食物中毒占首位或第二位【3】。生物学 特性 沙门菌属肠杆菌科，革兰染色阴性杆菌，适宜温度为37°C.大多数沙门菌有 菌体鞭毛能运动，菌体溶解时能产牛内毒素【4】。有些沙门菌含有耐药因子，对 某些抗生素产生耐药作用。 沙门菌菌型繁多，已确认的沙门菌有2500个以上的血清型【5】。在我国已 发现200多个菌型。引起人类疾病的主要有猪霍乱沙门菌、鼠伤寒沙门菌、肠炎 沙门菌、鸡沙门菌和鸭沙门菌等10多个血清型。 检测方法 国标方法 GB/T4789.4-2010是我国目前规定的食品中沙门菌的标准检 测方法。该检测方法主要是根据沙门菌的特性，分五个步骤进行，即前増菌、选 择性増菌、选择性平板分离、生化试验和血清学分型鉴定。该方法检测技术成木 低，但检验程序复杂，耗时长，一般要4-7d才能得出准确的结果。针对此方法 的缺点，有研究者对其进行了改良，比较常用有以下三种： 1.1添加物质法 由于沙门菌具有特异性地分解丙烯乙二醇产酸，使中性红 指示剂变红的生化特性，在分离培养基中加入丙烯乙二醇，5■澳?4■氯?3?卩弓|味?D 咲喃半乳糖，可对沙门菌的分离与鉴定同步进行，使沙门菌检测所需时间从常规 方法的4?7d缩短至2d【6】。 1.2疏水网格滤膜法（HGMF）疏水网格滤膜法是利用滤膜的疏水性粘附细 菌细胞，通过膜进行选择性地培养，达到检测鉴定目的菌的作用。疏水网格滤膜 法对传统检测方法中的常规平板划线做了改进。样品通过滤膜的过滤，浓缩了样 品中的细菌，除去了多余的生长抑制物质，使目的菌粘附在疏水网格滤膜的小格 中，在疏水网格滤膜上倾入沙门菌选择性培养基，培养后即可计数。该方法比国 标法操作简化，检测吋间可缩短至3d左右【7】。 1.3显色培养法 显色培养法是在培养基中加入沙门菌某些特异性酶的底 物，该底物通常为无色，经特异性酶作用而显现一定的颜色，便于可疑沙门菌的 识别【8】。显色培养法使用方便，操作简单，可犬犬缩短检测吋间，能满足应急 或基层单位检测的需要，但成本较高，很难普及使用。 免疫学检测法利用抗原抗体的反应特性，对细菌进行鉴别和定型。沙 门菌免疫学检测方法大致可分为：酶联免疫吸附（ELISA）法、斑点酶联免疫吸 附（Dot?ELISA）法、荧光抗体染色（免疫荧光）法、自动酶标免疫检测仪、免疫 磁性分离法等。 2.1酶联免疫吸附测定法（ELISA） Kryinski与Heimsch 1977年首次将酶联 免疫吸附测定法用于食品沙门菌检测。随后有许多学者都利用ELISA法进行食品 沙门菌的检测，但他们使用的多价血清不同程度地存在交叉反应，使ELISA产生 假阳性，在实际工作中造成一定的困难。20世纪80年代，单克隆抗体技术问世 并日趋成熟，建立了沙门菌各种。抗原、H抗原的单抗，取代了常规因子血清进 行血清学鉴定、伤寒诊断、鸡白痢检疫，并显示岀单抗卓越的性能。王志亮等应 用淋巴细胞杂交瘤技术获得了 4株具有沙门菌广谱结合特性的单克隆抗体，其中 2株的反应互补，对已检菌株覆盖率达99%,而对其他受试肠杆菌均无交叉反应。 文其乙等在前人的基础上应用沙门菌属特异性单克隆抗体CB8和de7建立了检 测沙门菌的直接ELISA方法，并形成了快速检测试剂盒，它能检出肉类样品中至 少5cfu/25g,并在48h内得出结果,最低检出量为106cfu/ml,特异性和灵敏性 分别为100%和99%【9】。黄素珍等采用筛选强阳性杂交瘤细胞株制备了高效价 的3-47-26单克隆抗体，建立了检测肠炎沙门菌的抗原竞争ELISA方法，利用样 品中的Lps抑制酶标抗体与包被的Lps结合，以降低底物反应的颜色，从而达到 检测的目的[10-12]o通过单克隆抗体大大降低了假阳性率，使ELISA法得以在 基层逐渐推广。 2.2斑点酶联免疫吸附（Dot?ELISA）方法斑点酶联免疫吸附试验是以微 孔滤膜为固相载体的一项免疫酶技术，具有简单、快速、敏感、特异性强等特点， 并具有较高的可重复性，比国标分离培养方法缩短3-4d,而且阳性反应色斑易于 观察，阳性检出率也高于常规方法。应用该方法检测食品中沙门菌的报道很多。 蔡家