山羊支原体山羊肺炎亚种的分离鉴定及膜蛋白抗体间接血凝检测方法的建立预防兽医学专业论文.docxVIP

目 录 1 引言 1 1.1 山羊传染性胸膜肺炎的研究进展 1 1.1.1 山羊传染性胸膜肺炎的病原 1 1.1.2 流行病学 2 1.1.3 致病机理 2 1.1.4 临床症状 3 1.1.5 病理变化 3 1.1.6 诊断 3 1.1.6.1 病料的采样和处理 3 1.1.6.2 病原分离与培养 3 1.1.6.3 Mccp 的鉴定 4 1.1.6.3.1 形态学鉴定 4 1.1.6.3.2 生化鉴定 4 1.1.6.3.3 血清学鉴定 5 1.1.6.3.4 PCR 鉴定 6 1.1.7 防治措施 7 1.2 本研究的目的和意义 7 1.3 试验主要内容 8 1.3.1 Mccp 株的分离鉴定 8 1.3.2 Mccp 间接血凝检测方法的建立 8 2 Mccp 的分离培养与鉴定 9 2.1 实验材料 9 2.2 试验方法 9 2.2.1 病料的采集 9 2.2.2 分离与培养 9 2.2.3 Mccp 的鉴定 10 2.3 实验结果 13 2.3.1 临床症状与病变 13 2.3.2 分离培养结果 14 2.3.2.1 支原体在液体培养基生长情况 14 2.3.2.2 支原体在固体培养基生长情况 14 2.3.2.3 分离与纯化 14 2.3.3 鉴定结果 14 2.3.3.1 染色镜检 14 2.3.3.2 生化鉴定结果 16 2.3.3.3 生长抑制试验结果 16 2.3.3.4 通用引物 PCR 鉴定结果 17 2.3.3.5 特异引物 PCR 结果 17 2.4 讨论 18 2.4.1 山羊支原体肺炎亚种的分离培养 18 2.4.2 关于 Mccp 的鉴定 18 3 膜蛋白抗原间接血清学诊断实验 19 3.1 材料与方法 19 3.1.1 实验材料 19 3.1.2 实验方法 19 3.1.2.1 抗原的制备 19 3.1.2.2 山羊阴性和疑似血清制备 20 3.1.2.3 兔高免血清的制备 20 3.1.2.4 山羊阳性血清的制备 21 3.1.2.5 抗体效价的测定 21 3.1.2.6 敏感性试验 21 3.1.2.7 特异性试验 22 3.1.2.8 膜蛋白抗原的田间血清学诊断 22 3.1.3 实验结果 22 3.1.3.1 敏感性鉴定结果 22 3.1.3.2 特异性实验结果 23 3.1.3.3 膜蛋白抗原的田间血清学诊断结果 23 3.1.4 讨论 23 4 全 文 结 论 25 致 谢 26 参 考 文 献 27 附 录 30 作 者 简 介 31 内蒙古农业 内蒙古农业大学硕士论文 PAGE 11 PAGE 10山羊支 PAGE 10 山羊支原体山羊肺炎亚种的分离鉴定及膜蛋白抗体间接血凝检测方法的建立 1 引言 1.1 山羊传染性胸膜肺炎的研究进展 山羊传染性胸膜肺炎(contagious caprine pleuropneumonia,CCPP)是由多种支原 体引起的一种高度接触性传染病，主要的临床症状表现为高热、咳嗽、肺脏及胸膜 发生浆液性和纤维素性炎症。发病率为22%~30% ，个别地区高达60%~80%，死亡 率15%~30%，被世界动物卫生组织(Office International Des Epizooties,OIE)列为B类 动物传染病之一[1]。Thomas在阿尔及利亚最早发现CCPP，随后该病广泛传播。到目 前为止，苏丹、印度、巴基斯坦、土耳其、叙利亚、德国、意大利、中国等40多个 国家报道了该病的发生。CCPP是影响中亚、北非、中东等国家和地区山羊养殖业的 重要疾病之一。我国于1947年首发于甘肃, 继而在内蒙古、四川、山东、湖北、河 北、云南、江西、江苏等地发现。近几年，在湖南、河南、贵州、重庆、内蒙等地 区有CCPP的报道，给山羊养殖业造成了较大的经济损失[2]。 1.1.1 山羊传染性胸膜肺炎的病原 OIE规定山羊支原体山羊肺炎亚种(M.capricolum.subsp.capripneumoniae,Mccp) 是典型CCPP的唯一病原,标准株为F38。由于Mccp营养要求苛刻，培养条件严格， 在人工培养基上很难生长等特点，很难被分离到。直到1976年才由Macowan等于肯 尼亚分离到第一株Mccp并且验证了其致病性[3]。随后，世界各地如苏丹、突尼斯、 乌干达、坦桑尼亚、土耳其等14个国家都有