物质对光的选择性吸收.docVIP

第三节 吸光光度法 一、测定原理 基于物质对光的选择性吸收而建立的分析方法称为吸光光度法，包括比色法、可见分光光度法及紫外分光光度法等。本章重点讨论可见光区的吸光光度法。 有些物质的溶液是有色的，例如溶液呈紫红色，水溶液呈橙色。许多物质的溶液本身是无色或浅色的，但它们与某些试剂发生反应后生成有色物质，例如与生成血红色配合物； 与邻二氮菲生成红色配合物。有色物质溶液颜色的深浅与其浓度有关，浓度愈大，颜色愈深。如果是通过与标准色阶比较颜色深浅的方法确定溶液中有色物质的含量，则称为目视比色法，如果是使用分光光度计，利用溶液对单色光的吸收程度确定物质含量，则称为分光光度法。 吸光光度法主要用于测定试样中的微量组分，具有以下特点： (1)灵敏度高。常可不经富集用于测定质量分数为～。的微量组分，甚至可测定低至质量分数为～的痕量组分。通常所测试的浓度下限达～。 (2)准确度高。一般目视比色法的相对误差为5％～l0％，分光光度法为 2％～5％。 (3)应用广泛。几乎所有的无机离子和许多有机化合物都可以直接或间接地用分光光度法进行测定。不仅用于测定微量组分，也能用于高含量组分的测定及配合物组成、化学平衡等的研究。如农业部门常用于品质分析、动植物生 理生化及土壤、植株等的测定。 (4)仪器简单，操作方便，快速。近年来，由于新的、灵敏度高、选择性好的显色剂和掩蔽剂的不断出现，以及化学计量学方法的应用，常常可以不经分离就能直接进行比色或分光光度测定。 （一）物质对光的选择性吸收 1．光的基本性质 光是一种电磁波，同时具有波动性和微粒性。光的传播，如光的折射、衍射、偏振和干涉等现象可用光的波动性来解释。描述波动性的重要参数是波长、频率，它们与光速c的关系是： (10．1) 在真空介质中光速为2.9979，约等于还有一些现象，如光电效应、光的吸收和发射等，只能用光的微粒性才能说明，即把光看作是带有能量的微粒流。这种微粒称为光子或光量子，其能量E决定于光的频率。 (10．2) 式中E为光子的能量(J)；h为普朗克常数(6.626)。 由式(10．2)可知，A越小，E越大，所以短波能量高，长波能量低。 我们将眼睛能够感觉到的那一小段的光称为可见光，它只是电磁波中的一个很小的波段(400～750 nm)，也就是我们日常所见的日光、白炽光，是由红、橙、黄、绿、青、蓝、紫七种不同色光组合而成的复合光(即由不同波长的光所组成的光)。理论上，将仅具有某一波长的光称为单色光，单色光由具有相同能量的光子所组成。由不同波长的光组成的光称为复合光。单色光其实只是一种理想的单色，实际上常含有少量其他波长的色光。各种单色光之间并无严格的界限，例如黄色与绿色之间就有各种不同色调的黄绿色。不仅七种单色光可以混合成白光，两种适当颜色的单色光按一定强度比例混合也可得到白光。这两种单色光称为互补色，例如绿色光和紫色互补，黄色光和蓝色光互补等。 2．光吸收曲线 颜色是物质对不同波长光的吸收特性表现在人视觉上所产生的反映。一种物质呈现何种颜色，是与入射光的组成和物质本身的结构有关。如果把不同颜色的物体放在暗处，什么颜色也看不到。当光束照射到物体上时，由于不同物质对于不同波长的光的吸收、透射、反射、折射的程度不同而呈现不同的颜色。溶液呈现不同的颜色是由溶液中的质点(离子或分子)对不同波长的光具有选择性吸收而引起的。当白光通过某一有色溶液时，该溶液会选择性地吸收某些波长的色光而让那些未被吸收的色光透射过去即溶液呈现透射光的颜色，亦即呈现的是它吸收光的互补色的颜色。例如， 溶液选择吸收了白光中的绿色光，与绿色光互补的紫色光因未被吸收而透过溶液，所以溶液呈现紫色。 当依次将各种波长的单色光通过某一有色溶液，测量每一波长下有色溶液对该波长光的吸收程度(吸光度A)，然后以波长为横坐标，吸光度为纵坐标作图，得到一条曲线，称为该溶液的吸收曲线，亦称为吸收光谱。 （3）吸收光谱产生的原理 吸收光谱一般有原子吸收光谱和分子吸收光谱。原子吸收光谱是由原子外层电子选择性地吸收某些波长的电磁波产生跃迁而引起的。我们所讨论的溶液的吸光度，属于分子吸收，所产生的光谱为分子吸收光谱，是分子中的价电子在分子轨道间跃迁产生的。在分子中，除了电子相对于原子核的运动之外，还有原子核的相对运动，分子作为整体围绕其重心的转动、分子的平动，以及原子之间的相对振动和分子中基团间的内旋转运动。因此，在分子中，除了电子运动能E。原子的核能E小分子转动能E，和分子平动能E。外，还有原子间的相对振动能E。和基团间的内旋转能E。等。当不考虑各种运动之间的相互作用时，可近似地认为分子的总能量为： 由于在一般化学实验条件下，不发生变化，和又比较小，所以一般只需考虑电子运动能量、振动能量和转动能量： 而这三种能量又都是量子化的，对应有一