第七章 基因诊断与治疗.ppt

一、概念：基因诊断 基因治疗 基因替换 自杀基因 二、基因诊断的基本策略与步骤 三、目前基因治疗采用的方法分为哪几种？ 四、基因治疗的基本过程（程序） 五、基因治疗主要的问题 小 结 谢谢各位！ 2014.4 * 基因治疗中，选择什么样的细胞作为基因转染的靶细胞，是基因治疗成功与否的一个重要因素。可供选择的靶细胞有两大类。一类是生殖细胞，另一类是体细胞。 目前常用靶细胞主要有以下几种： 2. 靶细胞的选择 （1）造血细胞 造血组织细胞在体内多处分布，有较多的遗传病与造血组织有关，骨髓移植方法已经建立，使造血细胞成为基因治疗中最重要的受体细胞。骨髓中的造血干细胞能分化成各系血细胞，具有移植方便、繁殖能力强等特点，是基因治疗合适的靶细胞。 （2）皮肤成纤维细胞 容易移植并可经体外培养生长，在进行皮肤移植的鼠模型中可持续存在，因此皮肤成纤维细胞也可作为基因转移的靶细胞。 （3）肝细胞 肝是重要的代谢器官，许多遗传病都是由于肝特异的基因产物缺陷而引起的，肝也是肿瘤的高发部位；此外，肝细胞作为移植细胞也可在异位发挥功能，与葡萄糖基质连接的肝细胞可在腹腔内生存2个月，并在1个月内有功能。因此，肝细胞作为受体细胞是基因治疗研究的热点之一。 （4）血管内皮细胞 将基因导入血管内皮细胞，可以直接向血液中分泌基因表达产物。 （5）淋巴细胞 外周血淋巴细胞中的T淋巴担负着重要的免疫功能，也很容易从体内取出和回输，可以在体外进行培养和扩增，并对目前常用的几种基因转移方法都具有一定的敏感度。 （6）肌肉细胞 骨骼肌细胞的突出特点是可采用直接体内基因转移，即将真核表达载体直接注射入骨骼肌。 （7）肿瘤细胞 肿瘤细胞对目前绝大多数的基因转移方法都比较敏感，特别是肿瘤细胞始终处于旺盛的分裂状态，可进行高效率的转导。 （8）其它细胞 许多实质器官细胞、心肌细胞和脾细胞 3. 载体和基因转移方式的选择 如何选择合适的载体并有效的将外源性治疗基因导入受体细胞，是基因治疗中的一个重要环节。 目前用于基因治疗的载体和基因转移系统，主要有病毒性和非病毒性两种，应根据实际情况来选择合适的载体并使用相应合适的基因转移方案。 四、基因治疗的现状与问题 基因治疗方案用于人体之前必须进行三个阶段的试验，即体外研究、小鼠体内研究和灵长类动物体内研究，以保证对人体无害。 （1）遗传病的基因治疗研究 目前发现的单基因病至少已有6000余种，其中有临床改变的遗传病约3000种。随着人们生活条件与医疗水平的提高，多种传染病得到控制，而遗传病的危害逐渐突出。 应用：人类历史上第一种进行基因治疗的疾病是腺苷脱氨酶缺乏症，该病的基因治疗是一个较成功的范例。 1. 基因治疗的应用研究 基因治疗的临床应用 ADA缺乏症 French Anderson (NIH) LTR ADA SV40 neo LTR September 14, 1990 基因治疗的临床应用 Ashanti de Silva Ashanti was the first patient to be treated with gene therapy. Injections repeated 7 times in first 10.5 months ADA: 1% 25% 腺苷脱氨酶缺陷遗传病 腺苷脱氨酶（adenosine deaminase, ADA）是核酸代谢反应中催化腺嘌呤核苷（A）和脱氧腺嘌呤核苷（dA）脱氨的一种酶，含362个氨基酸。人ADA基因定位于20q12-q13.11染色体位置上。ADA的基因长32kb，由12个外显子和11个内含子构成。 正常情况下，ADA可由多种不同组织细胞类型表达。胸腺细胞和T淋巴母细胞表达ADA mRNA的水平最高。在ADA缺陷病人体内，ADA基因可发生错义突变或大片段缺失，亦可发生内含子序列缺失，从而导致相应的氨基酸序列的变化或发生氨基酸替代，改变蛋白质的空间结构及稳定性，使酶活性丧失，最终引发ADA缺陷。 腺苷脱氨酶(ADA)缺乏的严重联合免疫缺陷(SCID) ADA缺陷基因治疗的实验研究 从1984年开始，ADA缺陷病的治疗转向基因治疗研究。 ADA缺乏症基因治疗研究中，基因转移采用的是逆转录病毒载体途径。实验研究包括体外培养的离体细胞ADA基因的转移，低等动物（如小鼠等）淋巴细胞ADA基因转移、回输，以及较高等的动物如猴的淋巴细胞ADA基因转移、回输。 ADA缺陷的临床基因治疗 1990年，美国RAC与FDA批准了ADA缺陷的基因治疗。临床基因治疗于当年开始。第一个接受基因治疗的是一个4岁女孩。患儿从1990年9月起的10个半月中，共接受了7次自体细胞输注，同时每周注射PE