Mdivi-1在海马神经元缺血再灌注损伤中的作用与其机制.pdfVIP

引言 引言 脑缺血再灌注损伤可以引起神经细胞结构和功能的一系列变化，其引起的神经 细胞的损伤变化是脑卒中后致残和致死的重要原因。脑缺血引起一系列神经细胞的 损伤，从而引起相应的临床症状，然而早期恢复脑缺血部位的血液灌注是这种缺血 性疾病的主要治疗方法。研究表明，在脑缺血超过一定的时间后再恢复血液灌注， 会加重神经细胞的损伤，这就构成了缺血再灌注损伤(ischemic reperfusioninjury,I／R injury)。细胞凋亡是缺血再灌注损伤后细胞死亡的重要途径之一，而细胞凋亡信号 的转导又分为两种，即分别为线粒体介导的凋亡通路和死亡受体介导的凋亡通路 【l圳。线粒体的分裂和融合介导了线粒体介导的凋亡通路【5‘6J。研究表明，线粒体分 裂参与心肌缺血再灌注损伤和急性肾损伤诱发的细胞凋亡【7。8】。而其在脑缺血再灌注 时海马神经元凋亡中的作用尚不清楚。因此，减轻缺血再灌注损伤后的脑细胞损伤 在治疗缺血性脑血管疾病中具有重要的临床意义，这也是本研究的临床目的。 线粒体通过呼吸链的氧化磷酸化对细胞的生命活动进行调控，研究表明其同时 也是细胞凋亡的调控中心。研究已经证实，线粒体在细胞的能量代谢、细胞内部的 信号转导、细胞的凋亡过程(主要由细胞凋亡因子如细胞色素C、凋亡诱导因子和 外还参与了ROS的生成从而引起细胞的氧化应激损伤[101。在缺血再灌注损伤时， 线粒体内能量代谢障碍，引起ROS产生增加，促进细胞色素C释放，从而导致细胞 的凋亡¨¨。在缺血再灌注损伤中，线粒体是ROS的产生场所，ROS反过来又加重 线粒体的氧化应激损伤，进一步加重细胞的损伤，这就形成了一个恶性循环。细胞 的凋亡是多种蛋白相互作用的结果，其中包括促凋亡蛋白(如Bax)和抑制凋亡蛋 素C的释放来调控细胞的凋亡1121。Bcl．2蛋白家族是线粒体介导的细胞凋亡途径的 重要执行者。目前已经发现的Bcl．2蛋白家族按照其功能不同可以分为两类：一类 31。细胞凋亡主要受 是具有促进细胞凋亡作用的蛋白，如Bax、Bad、Bak、Bid等【l 这两类蛋白的调控，细胞凋亡时，Bax首先从线粒体胞浆转移到线粒体外膜，促进 线粒体通透性转换孔的开放，进一步介导线粒体中如细胞色素C、凋亡蛋白酶活化 factor 1，APAFl)等很多与凋亡相关的因子释放到 因子1(Apoptoticproteaseactivating 种特定的蛋白二聚体则可以调控细胞凋亡信号通路，起到分子开关的作用。 近年来，科学研究主要集中于线粒体的形态与细胞凋亡上，尤其是两者的相互 青岛大学硕士学位论文 关系，这就使研究线粒体分裂与细胞凋亡之间的关系成为焦点。线粒体分裂可以引 起线粒体的片断化，然而线粒体片段化是细胞凋亡的前提。有研究表明通过药物(如 mdivi．1)来抑制线粒体分裂蛋白Drpl可以抑制心肌缺血再灌注损伤后心肌细胞的 diseases的神经 凋亡【14】。同时也有研究证实抑制线粒体分裂也可以抑制Parkinson’S 细胞凋亡【l51。但是关于线粒体分裂在脑缺血再灌注损伤中的研究，尤其是抑制线粒 体分裂后的神经细胞保护作用的研究目前仍是空白。线粒体分裂抑制剂 (mitochondrialdivision 化和聚集，从而抑制线粒体的分裂和片段化。因此，通过研究线粒体分裂抑制剂在 脑缺血再灌注损伤中的神经细胞保护作用及其机制，可以为寻求脑保护作用的新靶 点提供新的思路。本实验通过建立体外的细胞缺血再灌注损伤模型，来探讨线粒体 分裂抑制剂在脑神经细胞的缺血再灌注损伤中的作用及其减少细胞凋亡的分子机 制。 第一章材料与方法 第一章材料与方法 1．1实验材料 1．1．1实验动物 出生24d时之内的SD大鼠(由青岛市药检所动物中心提