老瓜头效毒成分7-脱甲氧基娃儿藤碱富集及醋制降毒机制初步研究-药物分析专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 宁夏医科大学学位论文独创性声明 本人郑重声明=所呈交的学位论文，是个人在导师的指导下，独 立进行研究工作所取得的成果，无抄袭及编造行为。除文中已经特别 加以注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体己经发表或 撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均己 在文中以明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果由 本人承担。 论文作者签名万7截至二 论文导师签名平显边 20ft 年立月(!，日 do 11- 年s-月3-日 宁夏医科大学关于学位论文使用授权的声明 宁夏医科大学有权保留使用本人学位论文，同意学校按规定向国 家有关部门机构送交论文的复印件和电子版，允许被查阅和借阅。本 人授权宁夏医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关 数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复印手段保存和汇编本 学位论文。可以公布〈包括刊登〉论文的全部或部分内容。 〈保密论文在解密后应遵守此规定〉 论文作者签名J互直主 论文导师签名 1?如去 )，o IS 年 r 月 I日 J叫年i--月 \3 日 宁夏医科大学硕士研究生学位论文 宁夏医科大学硕士研究生学位论文 中文摘要 老瓜头效毒成分 7-脱甲氧基娃儿藤碱富集及 醋制降毒机制初步研究 摘 要 目的 从老瓜头干燥全草 70%乙醇提取物中富集镇痛效-毒成分 7-脱甲氧基娃儿藤 碱（7-Demethoxylophorine，DEM），并优化提取工艺；通过比较醋制前后主要毒性成分 挥发油及 DEM 的变化，为进一步深入阐述老瓜头醋制降毒机理奠定基础；以 DEM 为 指标，优化老瓜头醋制降毒工艺条件，保证临床用药安全。 方法 70%乙醇微波萃取老瓜头全草 16.8 Kg，回收溶剂后，浸膏上 001×7 型阳离子 交换树脂，富集总生物碱，再经由硅胶、Sephadex LH-20 等各种色谱技术分离纯化生物 碱，利用 1H-NMR、13C-NMR 和 2D-NMR 对其进行结构解析，寻找目标化合物。建立 DEM 的 HPLC-UV 含量测定方法，以其含量为考察指标，采用四因素三水平 L9（34） 正交设计优化其提取工艺。以建立的 HPLC-UV 方法，测定并比较生品与醋制品（陈醋、 白醋）甲醇提取物中 DEM 的含量差异，采用 GC-MS 对石油醚及二氯甲烷萃取物进行 成分分析。以 DEM 含量为考察指标，采用正交设计 L16（45）优化其醋制工艺。 结果 1. 共富集得到总生物碱 236.5 g，得率为 1.41%，并从总生物碱中分离得到 1 个生 物碱单体（200 mg），经鉴定为目标化合物，得率约为 0.25%； 2. 建立了 DEM 的 HPLC-UV 含量测定方法，专属性强，标准曲线线性回归 Y=93649X-20052（r=0.9999），在 0.11~70.4 μg/mL 浓度范围内线性关系良好，LLOQ 为 110 ng/mL，LLOD 为 33.3 ng/mL。日内、日间精密度及重复性符合测定要求。 3. 采用正交设计优选的最佳提取工艺为：选用 1:10 的料液比，80%甲醇超声提取 30 min，验证实验测得 DEM 含量为（348.27±2.8）μg/g（RSD＝0.8%，n=3），高于原 有试验值。 4. 陈醋、白醋制品 DEM 的含量分别较生品显著降低了 0.23 倍、0.18 倍（P0.01， 1 n=6），陈醋制品比白醋制品下降得更多（P0.01，n=6）。 GC-MS 分析结果显示不同炮制品挥发性成分（石油醚提取物）组成基本一致，但 醋制后相同组份的峰面积大多明显减小，白醋制品散失最多。陈醋制品二氯甲烷萃取物 较生品变化较大，有生品中不含或极微量的成分产生或增加。 5. 醋制工艺优化结果表明，炮制用醋的浓度对 DEM 含量影响显著（P0.05），通 过极差直观分析和方差分析结果，确定最佳炮制工艺为 A1B4C1D1，即采用稀释为 30% 醋液，浸泡药材 24 h，60℃烘制 40 min。 结论 1. 总生物碱在老瓜头全草中的含量较低，DEM 的含量仅为 0.034%左右，得率低于 0.3%，富集难度大。 2. 醋制老瓜头与生品相比，效-毒成分 DEM 含量显著下降，同时挥发性成分由于 加热大量散失，是醋制减毒的重要机制。 3. 正交设计优选得到的提取工艺和醋制工艺，方法简便可靠，可为老瓜头的药用和 临床用药安全提供参考。 关键词：老瓜头，7-脱甲氧基娃儿藤碱，减毒机制，醋制，正交设计 2 宁夏医科大学硕士研究生学位论文英文摘要 宁夏医科大学硕士研究生学位论文 英文摘要 Enrichment of 7-Demethoxylophorine, the active and toxic component in Cynan