基因工程的下游技术重组蛋白的表达纯化以及分析.pptVIP

基因工程的下游技术  重组蛋白的表达、纯化和分析  重组蛋白的表达 表达体系： 表达载体 原核 受体细胞 真核 选择表达载体常用的关键元件： 启动子和调节序列（表达强弱、细胞或组织特异性、表达调节等，如本实验的乳糖操纵子。） 融合基因（纯化、标签，或增强蛋白可溶性等。如多聚His标签－6×His，便于镍柱亲和层析纯化。GST融合蛋白用GST柱亲和层析） 分泌信号 筛选标记 其它 6×His 重组蛋白的纯化 亲和层析 离子交换层析 凝胶过滤层析 …… 本单元实验流程： 细菌（pEF-GFPuv） 亲和层析 IPTG诱导 细菌总蛋白 重组蛋白融合蛋白 乳糖操纵子的特性 SDS 初步分析 实验十 重组DNA在大肠杆菌中的诱导表达 实验目的 实验原理 材料与试剂 实验仪器 操作步骤 注意事项 实验安排 思考与讨论 实验目的 了解和掌握IPTG诱导表达的原理。 了解降解物阻遏的现象及其机理。 实验原理 操纵子是基因表达的协调单位。通常由2个以上功能相关的结构基因以及一些调节序列（如启动子序列、操纵序列等）组成。 乳糖操纵子由三个结构基因Z、Y、A和操纵序列、启动子、CAP结合位点等调节序列组成。 乳糖操纵子的诱导表达 当没有乳糖存在