富油能源微藻斜生栅藻异养培养条件的优化.doc

富油能源微藻斜生栅藻异养培养条件的优化 《渔业现代化}2011年第38卷第5期 富油能源微藻斜生栅藻异养培养条件的优化 季祥,王金荣,王新平,朱文祥,蔡禄 (1内蒙古科技大学生物工程与技术研究所,内蒙古包头014010; 2内蒙古自治区生物质能源化利用重点实验室,内蒙古包头014010) 摘要:为了提高可作为生物质能源微藻原料的富油斜生栅藻(Scenedesmusobliquus)的生物量,以BG1l培养 基为基础培养基,对碳(c),氮(N),磷(P)等3种营养盐进行了优化,采用了单因素和(3)正交试验进行 优化.结果表明:异养培养斜生栅藻的最适碳源为葡萄糖;最适氮源为硝酸钠;3种营养盐最佳水平组合为: 葡萄糖质量浓度为20g/L,NaNO3质量浓度为2.Og/L,K2HPO?3H2O质量浓度为0.15L.富油斜生栅 藻在优化后的培养基中生长情况良好,稳定期最大生物量(A)可达10.276,可作为后续生物柴油生产的原 料. 关键词:斜生栅藻;微藻生物柴油;异养培养;培养条件优化 中图分类号:$963.213文献标识码:A文章编号:1007-9580(2011)05-01-06 随着人类社会资源短缺和环境问题的日益突 出,全球正面临着能源匮乏和生态环境破坏的危 机.因此,寻求一种绿色的可再生的新能源成为 世界各国科学家普遍关注的科学问题LlJ.生物 柴油是清洁的环境友好型可再生能源,但由于其 原材料成本较高,目前生物柴油的价格仍高于传 统柴油.而在众多的生物柴油原料中,微藻具有 较多优点,微藻与陆生作物相比,具有生物量大, 生长周期短,脂质含量高,不占用耕地等特点,已 成为生物燃油原料的首选【2J.通过自养或异养 培养微藻,控制其培养条件,藻类细胞可以大量积 累油脂J,利用微藻油脂转化生产生物柴油,具 有广阔的开发前景. 内蒙古中西部地区阳光充沛,气候适宜,湖泊 众多,天然生长着丰富的富油淡水微藻.笔者大 量筛选了内蒙古中西部地区湖泊中的优势藻种, 并对部分藻株进行了光自养培养条件的优化,得 到在自养条件下各藻株的最佳培养条件L4.微 藻的异养生长可以消除光的限制,更有利于提高 藻细胞密度和产量.为了实现藻种的规模化培 养,采收后提油作为制备生物柴油的原料,对其中 一 株生长较好,含油量较高的斜生栅藻进行了异 养培养条件的优化,为其作为生物柴油原料而大 规模生产应用提供理论依据. 1材料与方法 1.1藻种来源 试验用斜生栅藻(Scenedesmusobliquus)藻种 为内蒙古科技大学生物工程与技术研究所保藏, 该藻种是从内蒙古包头市南海湖中分离得到的一 株绿藻,藻细胞含油量达干重31%. 1.2培养基组成与培养条件 基础培养基为斜生栅藻光自养培养基(BG11 基础培养基)添加有机碳源配制而成,调初始pH 值为6.5.250mL的三角瓶中加入100mL的培 养液,121℃灭菌20min.超净工作台中取样和 接种,接种量为20%,此时培养液初始A啪值约为 0.1,置于(26±1)oC,150r/min的摇床中进行异 养培养. 1.3藻生物量测定与数据统计分析 藻生物量的测定采用浊度比色法”J.本试 验用752紫外可见分光光度计在波长680nm处 测定培养液的吸光度(A锄). 收稿日期:2011-06.12修回日期:2011-08-06 基金项目:教育部春晖计划(Z2009—1-01057);内蒙古自然科学基金(2010MS0521);内蒙古科技大学创新基金项目(2009NC061). 作者简介:季祥(1978一),男,副教授,从事生物质能,生物制浆研究.E—mail:.mjixiang@sina.corn 通讯作者:蔡禄(1964一),男,教授,主要从事生物质能,生物信息,分子生物学研究.E—mail:nmcailu@163.corn 2《渔业现代化/2Ol1年第38卷第5期 试验数据采用Excel2003软件结合正交设计 助手II(专业版)软件进行统计分析.正交设计 助手II(专业版)是一款针对正交试验设计及结 果分析而制作的专业软件. 1.4斜生栅藻异养生长条件的优化 1.4.1斜生栅藻异养培养有机碳源的优化 微藻的异养培养是微藻用一种或多种有机物 作为能源和碳源在黑暗中生长J.对异养斜生 栅藻来说,有机碳源不仅是细胞结构中碳架的来 源,而且还是细胞生命活动的能量来源.本试验 选用5种有机碳源,分别为葡萄糖,D一果糖,麦芽 糖,蔗糖及可溶性淀粉,用量均为10L,以不加 碳源为对照进行碳源的优化. 1.4.2斜生栅藻异养培养氮源的优化 氮源是影响斜生栅藻细胞生长和繁殖的重要 元素.目前,还没有微藻能够同化空气中氮源的 报道,微藻只能对溶解于水体中的氮源加以利用. 微藻对不同形态的氮营养盐利用存在差异L9J. 量取与斜生栅藻光自