微生物学试验指导MICROBIOLOGYEXPERIMENT-la18net.ppt

微生物学实验课程要求 压力蒸汽灭菌 1、检查水位，放入物品。 2、加盖、拧紧 对称用力 3、加热升温 4、排冷空气 等压力升至0.5kg/cm2时，打开排气阀，排净冷空气。 5、升温、保压 等锅内压力升至所需数值（通常为1.03kg/cm2），保持压力20-30分钟。 6、降压、取物 实验内容及实验步骤 (continued) 思 考 题 （1） 高压蒸气灭菌开始之前，为什么要将锅内冷空气徘尽？灭菌完毕后。 “0”时才能打开排气阀，开盖取物? （2）在使用高压蒸气灭菌锅灭菌时，怎样杜绝一切不安全的因素? （3） 黑曲霉的孢子与芽孢杆菌的芽孢对热的抗性哪个强？为什么？ （4） 你知道紫外线灯管是用什么玻璃制作的?为什么不用普通灯用玻璃？ （5） 在紫外灯下观察实验结果时，为什么要隔一块普通玻璃? 菌 实验报告的书写 1、不同的小实验分开写； 2、实验目的、实验原理、实验步骤、实验结果、分析与讨论、思考题 3、实验时间、指导老师需注明 本次实验课结束 * * 微生物学实验 纪 律： 不迟到、不早退、不旷课、关闭手机 考 核： 平时成绩(40%) +实验报告（40%）+ 期末考试（20%） 平时成绩包括：预习情况、考勤、课堂实验情况等。 学 时：24学时 时间地点：3-14周（单），星期五 （5-8节 ），8号楼204室 实验报告的书写 1、不同的小实验分开写； 2、实验目的、实验原理、实验步骤、实验结果、分析与讨论、思考题； 3、实验时间、指导老师需注明。 4、实验报告在下周五前上交。 课堂纪律 严格遵守实验室规章制度 严肃课堂纪律 不允许无故旷课、早退（1次） 迟到（3次） 不能做与实验无关的事 实验室安全和卫生 安全 实验室严禁吸烟。 注意用水、防电和防火 正确使用化学试剂和仪器 卫生 每次实验需留下一组同学值日，协助保持实验室清洁 1、了解培养基的概念、种类和用途，明确培养基的配制原理。 2、学习掌握培养基配制的一般方法和步骤。 3、掌握高压蒸汽灭菌的原理和方法步骤。 实验目的 一 培养基的配制 培养基(culture medium)——是指人工配制的、适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质。 自然界中微生物种类繁多，营养类型多样，加之实验和研究目的不同，所以培养基的种类很多，不同种类的培养基一般都应含有微生物生长所需的碳源、氮源、能源、无机盐、生长因子和水六大营养要素，且各成分比例应合适。 为了满足微生物生长繁殖或积累代谢产物的要求，还必须控制培养基合适的pH。 实验原理 常用凝固剂是琼脂，固体培养基琼脂加量通常为1.5%-2%；半固体培养基琼脂加量为0.5%-0.8%。 实验原理 (continued) 常用培养基： 牛肉膏蛋白胨培养基广泛用于细菌的培养； 高氏一号培养基用于培养放线菌； 麦芽汁培养基和豆芽汁培养基通常用于酵母菌的培养； 马铃薯葡萄糖培养基被广泛用于培养霉菌。 牛肉膏蛋白胨培养基配方： 牛肉膏 3g 1.5g 蛋白胨 10g 5g NaCl 5g 2.5g 琼脂 15-20g 7.5-10g 水 1000ml 500ml pH 7.4-7.6 7.4-7.6 5-6人一组，每组 500ml ?斜面2支（每人），余装三角瓶 1、称量及溶化 2、调pH 3、加琼脂、溶化、定容、（过滤） 4、分装（每人2只试管）、加塞、包扎 5、灭菌 6、摆斜面 操作步骤 称量与溶化： 注意： 1）牛肉膏的称取：用玻璃棒蘸取适量牛肉膏，抹于称量纸上，勿取过量，不足时，再蘸取少量，逐步添加；然后将牛肉膏连同称量纸放入水中，稍等片刻牛肉膏即从称量纸上脱落，用玻璃棒将纸捞出即可。 操作步骤 (continued) 加琼脂、溶化、定容、（过滤） ? 琼脂一般应在调好了pH后加入，琼脂的加入不会影响培养基的pH。 ? 琼脂加入后应煮沸数分钟，以使其完全溶化，否则易出现分布不均，导致部分斜面不凝固或过软，另外部分则琼脂过多。 ? 加热过程中因水分蒸发而可能使培养基体积减小，应补充水分至所需量。 操作步骤 (continued) 分装： 1）装量： 液体