第二十章比色法和分光光度法.pptVIP

* 组分X和组分Y的吸收光谱重叠 拓展知识 纳米材料的良好光学性能,被用于生物染色剂和免疫标记物： 胶体Au、Ag纳米材料可用于对蛋白质染色,用分光光度法可检测到纳克级蛋白质。 纳米银的吸光光度法已用于Hg(Ⅱ)、Cr、Co、三聚氰胺、芳香族化合物、DNA序列、组氨酸以及组氨酸标记的蛋白、色氨酸、半胱氨酸和蛋白质等的测定 * 纳米材料与生物分析 * * * * * * * * * * * 无机及分析化学 南京大学化学化工学院 （第五版） * 第二十章 比色法和分光光度法 * 掌握光的吸收定律及其适用范围 掌握分光光度法的分析方法 了解显色反应及其条件的选择 了解比色法、分光光度法的特点 了解分光光度法仪器测量的误差及测量条件的选择 * 20.1　概述 * * 图20-1　不同浓度高锰酸钾溶液的光吸收曲线 λmax=525 nm KMnO4溶液对525 nm 的绿色光吸收最强,从而 呈现互补色-紫色 * 20.2　光吸收的基本定律 朗伯-比尔定律 A: 吸光度(absorbance) I0: 入射光强度 It: 透过光强度 K: 比例常数 b: 液层厚度 C: 溶液浓度 * ε摩尔吸收系数(molar absorptivity) Lambert－Beer定律是光吸收的基本定律，是各类分光光度法定量分析的依据和基础： A＝-lgT＝lg(I0/It)＝?bc * 总的吸光度具有加和性 A＝ ?1bc1 + ?2bc2 + ?3bc3 + …… b一般用cm表示; c 以g?L为单位时，?称为吸光系数，用a表示，单位为L ? g -1 ?cm -1 。 c 以mol?dm-3为单位时，?称为摩尔吸光系数，用?表示，单位为L ? mol -1 ?cm -1 。 在特定波长和溶剂情况下，摩尔吸光系数是物质的特征参数。 ?越大，测定时灵敏度越高。 * 偏离Lambert－Beer定律的因素 根据Beer定律，吸光度对浓度作图所得的直线截距为0，斜率为εb。但实际上，吸光度与浓度的关系有时是非线性的，或者不通过零点，即出现偏离Lambert－Beer定律的现象。 吸光度 浓度 2 1 3 1 无偏离 2 正偏离 3 负偏离 * 偏离的原因： 1. 比尔定律本身的局限性 2. 非单色入射光引起的偏离 3. 由于溶液本身发生化学变化的原因 而引起的偏离 化学变化包括：电离反应；酸碱反应；配位反应； 缔合反应；吸光物质浓度变化，产生偏离。 * 20.3.2 分光光度计的基本部件 光源→单色器→吸收池→检测系统→读数指示器 光栅 光二极管阵列多通道分光光度计光路图 * 检流计标尺透光度与吸光度的关系 A=-lgT=lg=lg100-lgI * 显色反应一般应充分考虑以下几个方面因素： 1. 显色剂的用量 2. 酸度对显色剂浓度、显色剂颜色、配合物组成、 被测离子存在的状态的影响 3. 显色时的温度和时间 4. 溶剂的影响 5. 干扰物质的影响及消除 显色反应与显色条件的选择 M(被测离子)+R(显色剂) == MR(有色配合物) * 20.5 分光光度法仪器测量误差及其消除 光度计读数误差是经常遇到的测量误差,当透光度读数太大或太小时,微小的透光度读数误差会造成相当大的浓度相对误差。 一般分光光度计透光率误差约在+0.2％-+2％之间，通常透光率控制在15-65％之间（吸光度0.2-0.8）。 相对误差 * 单组分定量方法 工作曲线法 比较法 相同条件下测定试样和标样溶液的吸光度，由标样浓度计算试样的浓度。必须遵循朗伯－比耳定律，试样浓度接近标样时准确度高。 * 多组分定量方法 组分X和组分Y的吸收光谱不重叠，则直接在各自的最大波长测定 * * * * * * * * * * *