兽药中非法添加药物快速筛查法.doc

附件 兽药中非法添加药物快速筛查法 （液相色谱—二极管阵列法） 1 适用范围 1.1 本方法适用于兽药及其原料与辅料中紫外光谱图库中所列非法添加药物的筛查。 1.2 用于紫外光谱图库之外的具有紫外吸收的非法添加药物的筛查时，需进行空白试验和检测限测定，并测定对照品溶液的紫外光谱图。 2 检查方法 照高效液相色谱法（《中国兽药典》一部附录0512）测定。 2.1 超高效液相色谱—二极管阵列法 色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（ACQUITY UPLC HSS T3 ，1.8 μm，2.1×100mm）；以水-1mol/L醋酸铵溶液（取醋酸铵77g，加水至1000ml，用冰醋酸调节pH值至5.0）（99∶1）为流动相A，甲醇-1mol/L醋酸铵溶液（99∶1）为流动相B，按下表进行梯度洗脱；流速0.45ml/min；二极管阵列检测器，采集波长范围为200 nm～400 nm，分辨率为1.2 nm，提取波长按需设定（如230 nm、270 nm、最大值图等）。 时间（min） 流动相A（%） 流动相B（%） 0.00 98 2 0.25 98 2 12.25 1 99 13.00 1 99 13.01 98 2 17.00 98 2 供试品溶液的配制 中药固体制剂 取50mg，加甲醇10ml，超声处理10分钟（必要时可调整）； 中药液体制剂 取10μl ~20μl，加甲醇10ml，摇匀； 化药液体制剂 取20μl，加甲醇10ml，摇匀； 其他化药制剂 取50mg，加甲醇10ml，超声处理约10分钟（必要时可调整），用甲醇稀释成含有效成分50μg~100μg /ml的溶液。 对照品溶液的配制（紫外光谱图库外品种） 用甲醇制成50 ~100μg /ml的溶液，溶解性差的对照品，可加适量盐酸或氢氧化钾溶液，使其溶解。 测定法 取供试品溶液2 μl注入液相色谱仪，同时记录色谱图与光谱图。通过与紫外光谱图库中对照光谱图最大吸收波长和图形的比对，确定供试品中是否含有相应非法添加药物。 可根据实验结果调整进样量或浓度，使紫外光谱图光滑、特征清晰。 结果判定 两者光谱图无明显差异，判为可疑阳性结果。 筛查结果呈可疑阳性的样品，需按农业农村部发布的非法添加检查方法标准进一步检验。 2.2 液相色谱—二极管阵列法 色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（Alltima C18，5μm，4.6×250mm）；以磷酸二氢钠溶液（取磷酸二氢钠3.0g，加水1000ml，加三乙胺0.5ml，用饱和氢氧化钠溶液调pH值至7.0）∶甲醇（70∶30）为流动相；流速1.0ml/min；二极管阵列检测器，采集波长范围为200 nm～400 nm，分辨率为1.2 nm，提取波长按需设定。 供试品溶液的配制 同2.1。 对照品溶液的配制 同2.1。 测定法 取供试品溶液10μl ~20μl注入液相色谱仪，其他同2.1。 结果判定 同2.1。 2.3 液相色谱—二极管阵列法（磺胺类） 色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（Alltima T3，5μm，4.6×250mm）；0.2%冰醋酸溶液∶乙腈（70∶30）为流动相；流速1.0ml/min；二极管阵列检测器，采集波长范围为200 nm～400 nm，分辨率为1.2 nm，提取波长按需设定。 供试品溶液的配制 同2.1。 对照品溶液的配制 同2.1。 测定法 取供试品溶液10μl ~20μl注入液相色谱仪，其他同2.1。 结果判定 同2.1。 2.4 液相色谱—二极管阵列法（氟喹诺酮类） 色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（Atlantis C18，5μm，4.6×250mm）；以磷酸溶液（取磷酸3ml，加水1000ml，用三乙胺调节pH 值至3.0±0.1，加乙腈53ml，摇匀）为流动相A，乙腈为流动相B，甲醇为流动相C，按下表进行梯度洗脱；流速1.0ml/min；二极管阵列检测器，采集波长范围为200 nm～400 nm，分辨率为1.2 nm，提取波长按需设定。 时间（分钟） 流动相A% 流动相B% 流动相C% 0 89.6 6.2 4.2 30.00 89.6 6.2 4.2 30.20 90 10 0 55.00 90 10 0 55.20 89.6 6.2 4.2 65.00 89.6 6.2 4.2 供试品溶液的配制 同2.1。 对照品溶液的配制 同2.1。 测定法 取供试品溶液10μl ~20μl注入液相色谱仪，其他同2.1。 结果判定 同2.1。 附：紫外光谱图库 紫外光谱图库 名称 编号 最大吸收波长(nm) 谱图 氨茶碱 001-1 206.9 273.5 001