第四篇第部分谷氨酸发酵.pptVIP

环境条件 7. pH值 1） pH值对谷氨酸产生菌生长的影响 谷氨酸产生菌象其它微生物一样, 有最适生长pH值范围, 当高于或低于这个值时:(1) 菌体内的酶受到抑制, 菌体新陈代谢受阻, 生长停滞; (2) 菌体细胞膜所带电荷发生改变, 从而改变细胞膜的渗透性, 影响菌体对营养的吸收和代谢产物的排出; (3) 影响培养基组分和中间代谢产物的离解, 从而影响菌体对这些物质的利用。 环境条件 2） pH值对谷氨酸积累的影响 谷氨酸脱氢酶是合成谷氨酸的主要酶,它的最适pH为7.0～7.2 ,当发酵液的pH值偏酸时(pH 5.0-5.8) ,谷氨酸脱氢酶受到抑制,代谢向着生成谷氨酰胺和乙酰谷氨酰胺的方向进行。 在发酵后期由于耗用大量NH4+ ,pH值下降, 此时就要进行pH值调节,以保证发酵的正常进行。 环境条件 pH发生变化的主要原因是培养基中营养成分的利用和代谢产物的积累。 如当谷氨酸棒状杆菌利用糖类物质不断生成谷氨酸时，培养液的pH就会下降。而碱性物质的消耗和氨的生成等则会导致培养液的pH上升。 pH：前期pH（7.5~8.0），中后期pH7.0~7.6。通过采用流加尿素，氨水或液氨等办法调节pH，补充氮源。 环境条件 8. 通风 （同1.供氧浓度） 通风的实质就是供氧并使菌体和培养基充分混合。谷氨酸产生菌为兼性好氧菌, 在有氧、无氧的条件下都能生长,只是其代谢产物不同。在谷氨酸发酵过程中,通风必须适度。 风量过大,氧气充足,在长菌阶段表现为耗糖慢, 菌体生长慢, pH值偏高, 产酸阶段, 供氢体被氧化,谷氨酸合成受阻,积累α - 酮戊二酸; 风量小, 供氧不足, 长菌阶段表现为菌体生长快,在产酸阶段,葡萄糖进入菌体后, 进行不完全氧化,产物由谷氨酸变为乳酸。 环境条件 9. 泡沫 谷氨酸发酵是好气性发酵, 因通风和搅拌产生泡沫是正常的, 但泡沫过多会带来一系列问题: (1) 泡沫形成泡盖时, 代谢产生的气体不能及时排出,妨碍菌体呼吸作用,影响菌体的正常代谢; (2) 泡沫过多, 发酵液会外溢,造成浪费和污染; (3) 泡沫过多,易冲上罐顶,造成染菌。因此,在谷氨酸的发酵过程中控制好过多的泡沫是发酵成败的关键。 谷氨酸产生菌的发酵条件与产物的关系 控制因子 发酵产品转换 氧气 乳酸或琥珀酸（通气不足）←→谷氨酸（通气充足） NH4+ α-酮戊二酸（缺乏）←→谷氨酸（适量）←→谷氨酰胺（过量） pH N-乙酰谷氨酰胺（酸性）←→谷氨酸（中性或微碱性） 磷酸 缬氨酸（高浓度）←→谷氨酸 生物素 乳酸或琥珀酸（丰富）←→谷氨酸（缺乏） 谷氨酸发酵过程中,生产菌种的特性、生长素、发酵温度、pH值、通风和发酵产生的泡沫都是影响谷氨酸积累的主要因素。在实际生产中,只有针对存在的问题,严格控制工艺条件,才能达到稳产、高产的目的。 假设人们想利用葡萄糖、谷氨酸棒状杆菌生产α-酮戊二酸，请你利用现有知识，设计一个大量积累α-酮戊二酸的方案? 菌种：对谷氨酸捧状杆菌进行诱变处理，选育不能合成谷氨酸脱氢酶的菌种 条件：氧（通风）、NH4+、C/N；pH、磷酸盐、温度、生物素、 Mn+ 代谢的人工控制及其在发酵工业中的应用 工业发酵的目的：大量积累人们所需要的微生物代谢产物。 代谢的人工控制：人为地打破微生物的代谢控制体系，使代谢朝着人们希望的方向进行。 人工控制代谢的手段： 改变微生物遗传特性(遗传学方法）； 控制发酵条件（生物化学方法）； 改变细胞膜透性； 总结 1 营养缺陷型菌株的应用 末端产物E对生长乃是必需的，所以，应在培养基中限量供给E，使之足以维持菌株生长，但又不至于造成反馈调节（阻遏或抑制），这样才能有利于菌株积累中间产物C 。 （1）对于直线式代谢途径：选育营养缺陷性突变株只能积累中间代谢产物 A a B b C c D d E (一)遗传学方法 (2) 分支代谢途径：情况较复杂，可利用营养缺陷型克服协同、或累加抗反馈抑制，积累末端产物，亦可利用双重缺陷发酵生产中间产物 A B C D E F G 分支途径——赖氨酸发酵:谷氨酸棒杆菌的Hom– 2 抗反馈控制突变株的应用 ★抗反馈控制突变株——是指对反馈抑制不敏感或对阻遏有抗性，或两者兼有之的菌株。 ★抗反馈控制突变株可以从终产物结构类似物抗性突变株和营养缺陷性回复突变株中获得。 目标产物 结构类似物 赖氨酸 S-（2氨基乙基）-L半胱氨酸-(AEC) 苏氨酸 ?-氨基-?-羟基戊酸（AHV) 异亮氨酸 乙硫氨酸 精氨酸 D-精氨酸 苯丙氨酸 对氟苯丙氨酸 3 选育组成型