细胞遗传学技术实验课人类外周血淋巴细胞染色体制备及染色技术.pptx

人类外周血淋巴细胞染色体制备及染色技术;;细胞收获流程演示;步骤总述：接种→培养→收获→滴片→烤片→消化→染色 1. 用吸管将培养瓶中的细胞吹打均匀，移入离心管中。 2. 离心管以2000～2200r/min，离心5分钟。 3. 弃上清液，加入已在37℃ 预热的 0.075mol/L的 KCL溶液8ml，充分混匀。在37℃水浴箱中低渗23分钟～30分钟 ;4. 低渗23分钟～30分钟时，配制固定液。甲醇与冰乙酸按3：1混匀。 5.预固定，低渗完之后，加固定液2ml 混匀，以2000～2200r/min，离心10分钟。 6. 弃上清液，每管加8ml 固定液混匀静置20分钟 ;7. 以2000～2200r/min，离心8分钟。 8. 弃上清液，每管加8ml 固定液混匀后即可离心，此步骤做2次。 9. 细胞沉淀制作细胞悬液，准备滴片。 10. 吸管吸取细胞悬液约0.3ml 在20cm～25cm的高度滴于玻片上，玻片的头体尾各一滴，玻片酒精灯过火。 ;11. 取染缸，调配染液 姬姆萨染液 ：取10ml～15ml姬姆萨母液，加入70ml的PBS缓冲液，充分混匀。 置于37℃水浴箱预热20分钟后使用。 12. 姬姆萨染色约2分钟。自来水冲洗风干;核型分析;做 最 优 秀 的 第 三 方 检 测 机 构 TO BE THE BEST INDEPENDENT LABORATOR