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胰蛋白酶的活力的测定;二、酶的化学组成;三、酶的活性中心
????必需基团 酶分子中与催化作用直接相关、不可缺少的化学基团。
????活性中心 酶分子中必需基团相对集中,构成一定空间结构区域,与催化作用直接相关。
????;用于判断和确定酶活型中心的主要方法:
1、专一性研究 通过研究酶的专一性底物的结构特点,来判断
和确定活性中心的结构特点。
2、酶侧链基团的化学修饰法 酶分子中可以被化学修饰的基团
很多,如巯基、羟基、咪唑基、氨基及羧基
等。;四、酶的命名与分类
习惯命名法
????按催化反应类型分类?? 脱氢酶、脱羧酶、连接酶、聚合酶等。
????按组织来源及性质分类?? 胃蛋白酶/胰蛋白酶,酸性/碱性磷酸酶等。
国际系统分类; 酶原与酶原激活 无活性的酶前身物称酶原。由无活性酶原转变为有活性酶的过程称酶原激活。
????同工酶 分子结构不同、理化性质也不同,但催化同一化学反应的一组酶,如乳酸脱氢酶(LDH)。
????别位酶 多亚基组成,其中有催化亚基、有调节亚基,小分子化合物结合调节亚基后分子构象改变,引起催化活性改变。
;五、酶的活力测定 ;胰蛋白酶活力单位的定义规定为:以BAEE为底物反应液pH8.0,25℃,反应体积3.0ml,光径1厘米的条件下,测定?A253,每分钟使?A253增加0.001,反应液中所加入的酶量为一BAEE单位。
;初速度 研究酶反应的动力学以酶促反应的初速度为准;;操作方法
取2个光程为1厘米的带盖石英比色杯,分别加入25℃予热过的2.8ml底物溶液。向一只比色杯中加入0.2ml 0.001mol/L HCl,作为空白,校正仪器的253nm处光吸收零点。再在另一比色杯中加入0.2ml待测酶液,立即混匀并记时,每半分钟读数一次,共读3~4分钟。
绘制酶促反应动力学曲线,从曲线上求出反应起始点吸光度随时间的变化率(即初速度)?A253/min。
;样品胰蛋白酶BAEE活性单位=
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