试验十三石蜡切片法.ppt

3.包埋 是把被石蜡浸透的材料连同熔化的石蜡一起 倒入一定形状的容器内，并立即投入冷水中，使它 凝固成含材料的蜡块，以备切片。 三、实验程序 1．透明：透明也是渐次由低浓度至高浓度。材料先在纯酒精和二甲苯各半的混合液浸15—30分钟，再转入纯二甲苯中透明（至透明为止），一般15—30分钟。 2．透蜡：材料自二甲苯中取出后,先移入二甲苯和石蜡等量的混合液中约30分钟，然后进入纯石蜡中约40—60分钟，再换纯石蜡一次约40—60分钟。 3．包埋：从温箱中取出盛放纯石蜡的蜡杯，倒入包埋 用的纸盒中，取出存放材料的蜡杯，用温镊子夹取材料 平放于纸盒底部，使之排列整齐。将纸盒两侧的把手提 起，慢慢地平放在面盆的水面，待石蜡的表面凝固，将 纸盒慢慢浸入水中，待石蜡完全凝固（约30分钟）后即 可取出备用。 附：生物组织包埋机操作方法（演示）。 包埋机 3.包埋的注意事项 (1)包埋前应先把必需的用具（恒温箱、温台、纸盒） 准备好。 (2)包埋用的镊子要先放在温箱中预热。 植物组织的透蜡过程必须缓慢进行，所须的时间比较长，约需1-2天。其法如下：①将组织连同二甲苯一起倒入小蜡杯中；②然后轻轻倒入溶解的石蜡。石蜡就在二甲苯的上层凝固起来。此时可将小蜡杯放在35-37oC温箱内，使石蜡徐徐熔解到饱和为止，约需1-2天；③将蜡杯移入56-60oC温箱中，待石蜡熔解后，倒去含有二甲苯的石蜡，以后每隔1小时左右更换已熔的纯蜡一次，共换纯蜡2-3次即可进行包埋。 五、作业 1. 简述透明、透蜡、包埋的基本原理及注意事项。 2. 分析实验结果。 3. 交已包埋好的蜡块。 实验流程： 1. 脱水：85%酒精（30分钟）—95%酒精（30分钟）—100%酒精（30分钟）。 2. 透明：1/2纯酒精+1/2二甲苯（20分钟）——纯二甲苯中（ 15—30分钟，至透明为止）。 3. 透蜡：材料透明后移入1/2二甲苯+1/2石蜡等量的混合液中(30分钟)，然后进入纯石蜡Ⅰ中约40—60分钟，再换纯石蜡Ⅱ中约40—60分钟(此部分操作在温箱中进行)。 4. 包埋：纯石蜡注入包埋用纸盒中，取蜡杯，用温镊子夹取材料平放于纸盒底部，使之排列整齐。将纸盒慢慢地平放在面盆的水面，待石蜡的表面凝固后即可取出备用。 实验十九 石蜡切片法（三）— 切片、贴片 一、实验目的 1. 掌握切片、贴片的操作方法。 2. 了解切片、贴片过程中应注意事项。 二、实验原理 ? 切片是把包埋好的材料块用切片机切成所需厚度的切片带。 ?肝细胞（hepatocyte）体积较大，直径20～30μm， 贴片是用粘贴剂把切片平铺贴在载玻片上，以便于染色。 常用的黏附剂有APES(3-Aminopropyl-Triethoxysilane 3-氨丙基-3-乙氧基甲硅烷)、多聚-L-赖氨酸(Poly-L-Lysine)、明胶、甘油蛋清等 三、实验步骤 （一）切片 切片前的准备工作 （1）石蜡块的固着：先将蜡块用刀片切成方形或长方形，组织四周留下2—3mm宽的石蜡。点燃酒精灯，然后用烤热的蜡铲放在台木和蜡块之间，利用蜡铲的温度熔化两者的蜡，把蜡块粘附在台木上。 （2 ）整修：用单面刀片将蜡块四周修整平行。 2.切片机 一般常用的为轮转式切片机， 这种切片机的夹物部分是上 下移动，前后推进的，而夹 刀部分则固定不动。通过调 整控制刀片厚度的微动装置就 可以切出不同厚度的连续切片。 3．切片的方法 （1）将已固定修好的石蜡块台木装在切片机的夹物台上。 （2） 将护刀盖推至打开位置。 （3）摇动快速进退手轮，使石蜡块与刀口贴近，但不超 过刀口。（注意：在转动手轮时，应保证机头在红、绿线之间移动。） （4）调整石蜡块与刀口之间的角度与位置，刀片与石蜡 切片约成15-30度。（已调好） （5）调整厚度调节器到所需的切片厚度，一般4-10微米。 （6）一切调整好后就可以切片。此时右手摇动大手轮， 左手持毛笔将蜡带提起，摇转速度以每分钟40-50转 为宜。 （7）切成的蜡带到20-30厘米时，右手用另一支毛笔将 蜡带挑起，平放在蜡带盘上。 （注意：靠刀面的一面较光滑朝下）。 （二）贴片 1．取一清洁的载玻片，滴一小滴（10uL）粘片剂于玻片中央， 用手指涂抹均匀，晾干。 2．用刀片割一小段蜡带，放在水浴锅水面上，使其伸展。用载玻 片斜插入水中，缓慢靠近蜡带，使