第八章电泳技术复件.pptVIP

蛋白质的鉴定 1 2 3 4 5 6 7 kDa — 43.0 — 31.0 — 20.1 — 500 图8　Western blot 检测目的蛋白在酵母细胞中的表达情况 Fig. 8 Western blot of the expressed products from pPICZαC- nSp Lane 1~2：Induced supernatant of pPICZαC- Sp transformant； 3~4：Induced supernatant of pPICZαC- 2Sp transformant； 5~6：Induced supernatant of pPICZαC- 4Sp transformant； 7：Low molecular weight protein marker. 实验三　蜘蛛牵引丝蛋白Spidroin2 cDNA重组酵母表达质粒的构建及其在Pichia酵母细胞中的表达 Fig 2.3 Digestion with EcoR I and Xho I 1: pET-Lep M: DL-2000 marker Fig 2.2 Identification of PCR 1: Lepin M: DL-2000 marker 1 M 441bp 2000bp 500bp M 1 441bp 2000bp 500bp 瘦蛋白原核表达载体的酶切与PCR鉴定 实 验 二 瘦蛋白基因在原核细胞中的表达及多克隆抗体的制备 Fig 2.5 SDSof leptin inclusion bodies, leptin after purification and refolding. M: Low molecular weight protein standard weight; 1: protein after refolding; 2: purified protein; 3: inclusion bodies; 4: bacterial proteins; 5: control 97kDa 43kDa 20kDa M 1 2 3 4 5 包涵体蛋白的纯化、复性 实 验 二 瘦蛋白基因在原核细胞中的表达及多克隆抗体的制备 + – pH 3 pH 7.5 pH 10 + – pH 3 pH 7.5 pH 10 + – pH 3 pH 7.5 pH 10 + – pH 3 pH 7.5 pH 10 2-D Electrophoresis The 1st D: Isoelectric Focusing pI M.Wt. * 电泳技术刘松财2011 本章的主要内容 电泳技术的应用 电泳概念 电泳分类 电泳原理 一、概念 电泳（Electrophoresis）：在直流电场中，带电粒子向带符号相反的电极移动的现象称为电泳。 二、电泳分类 电泳法可分为自由电泳（无支持体）及区带电泳（有支持体）两大类。自由电泳法的发展并不迅速，因为其电泳仪构造复杂、体积庞大，操作要求严格，价格昂贵等。而区带电泳可用各种类型的物质作支持体，其应用比较广泛。区带电泳的分类如下：  1．按支持物物理性状不同，可分为： (1)滤纸及其他纤维素膜如乙酸纤维膜、玻璃纤维膜、聚胺纤维膜电泳。 (2)粉末电泳，如纤维素粉、淀粉、玻璃粉电泳。 (3)凝胶电泳，如琼脂糖、琼脂、硅胶、淀粉胶、聚丙烯酰胺凝胶电泳。 (4)丝线电泳，如尼龙丝、人造丝电泳。 2．按支持物的装置形式不同，可分为： (1)平板式电泳，支持物水平放置，是最常用的电泳方式。 (2)垂直板式电泳。 3．按pH的连续性不同，可分为： (1)连续pH电泳：电泳的全部过程中缓冲液pH保持不变。如纸电泳、乙酸纤维膜电泳。 (2)非(不)连续pH电泳：缓冲液与支持物之间有不同的pH，如聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳、等电聚焦电泳、等速电泳等，能使分离物质的区带更加清晰，并可作ng级微量物质的分离。 三、电泳的基本原理 电泳(Electrophoresis)是指带电荷的胶体粒子在电场作用下的定向移动现象。氨基酸、多肽、蛋白质和核酸等具有可解离基团，在溶液中能够形成带电荷的离子，不同物质由于带电性质不同，因而在一定电场强度下移动速度不同。不同的带电颗粒在同一电场中的泳动速度不同，常用迁移率或泳动速度表示。迁移率的