生物化学：第一章蛋白质.pptVIP

蛋白质变性与复性 　 ● 蛋白质各自所特有的高级结构，是表现其物理性质和化学特性以及生物学功能的基础。 当天然蛋白质受到某些物理因素和化学因素的影响，使其分子内部原有的高级构象发生变化时，蛋白质的理化性质和生物学功能都随之改变或丧失，但并未导致其一级结构的变化，这种现象称为变性作用（denaturation）。 表征：生物活性丧失；物理性质（溶解度、粘度、扩散系数、光谱特性等）和化学性质（化学反应，被酶解性）改变 应用：变性灭菌、消毒；变性制食品；抗衰老…… 蛋白质复性 ●蛋白质的变性作用如果不过于剧烈，则是一种可逆过程，变性蛋白质通常在除去变性因素后，可缓慢地重新自发折叠成原来的构象，恢复原有的理化性质和生物活性，这种现象成为复性（renaturation）。 蛋白质的紫外吸收光谱 蛋白质在远紫外光区（200-230nm）有较大的吸收，在280nm有一特征吸收峰，可利用这一特性对蛋白质进行定性定量鉴定。 蛋白质质量浓度/（mg/ml）=1.55A1cm - 0.76A1cm 280 260 测定范围：0.1～0.5mg/ml 蛋白质主要呈色反应 双缩脲反应 酚试剂反应 →蛋白质定量、定性 茚三酮反应 测定常用方法 双缩脲反应 蛋白质在碱性溶液中也能与硫酸铜发生相同反应，产生红紫色络合物 红紫色络合物 (硷性溶液) Cu2+ 第七节 蛋白质的分类 根据分子形状分类 球状蛋白质 纤维状蛋白质 结合蛋白质 根据组成分类 简单蛋白质 活性蛋白质（如酶蛋白、转运蛋白、运动蛋白、 保护和防御蛋白、受体蛋白…...） 根据功能分类 非活性蛋白质（如硬蛋白、角蛋白） 简单蛋白质分类 结合蛋白质分类 一、蛋白质的分离纯化 蛋白质分离纯化的一般原则 提纯的目标：尽量提高蛋白质的纯度或比活性，设法除去变性的和不需要的蛋白质，尽可能提高蛋白质的产量。 根据蛋白质的性质加以选择，如分子大小，溶 解度、电荷、吸附性质及生物亲和力等。 第八节 蛋白质的分离纯化 问答题 1、为什麽说蛋白质是生命活动最重要的物质基础？ 2、试比较Gly、Pro与其它常见氨基酸结构的异同，它们对多肽链二级结构的形成有何影响？ 3、试举例说明蛋白质结构与功能的关系（包括一级结构、高级结构与功能的关系）。 4、为什么说蛋白质水溶液是一种稳定的亲水胶体？ 5、什麽是蛋白质的变性？变性的机制是什麽？举例说明蛋白质变性在实践中的应用。 ? 名词解释 等电点（pI） 肽键和肽链 肽平面及二面角 一级结构 二级结构 三级结构 四级结构 超二级结构 结构域 蛋白质变性与复性 分子病 肽 蛋白质电泳 蛋白质在溶液中解离成带电颗粒，在电场中可以向与其电荷相反的电极移动，这种现象称为：电泳 不同种类的蛋白质由于等电点的不同，在一个指定pH条件下所带电荷的性质和多少也不相同，加上它们分子量大小、颗粒形状的不同，因此在电场中移动的方向和速度各不相同。根据这一原理可用此方法对蛋白质进行分离和分析。 1）圆盘电泳：玻璃管中进行的凝胶电泳。 2）平板电泳：铺有凝胶的平板上进行的电泳。 + — - + 聚丙烯酰胺凝胶电泳 既可以作为蛋白质纯度检验方法，也可以纯化、制备蛋白质。 PAGE垂直平板电泳示意图 低浓度浓缩胶 高浓度分离胶 聚丙烯酰胺凝胶电泳具有三种物理效应： ①浓缩效应 ②分子筛效应 ③电荷效应 蛋白质胶体性质 由于蛋白质分子量很大，在水溶液中形成1-100nm的颗粒，因而具有胶体溶液的特征。可溶性蛋白质分子表面分布着大量极性氨基酸残基，对水有很高的亲和性，通过水合作用在蛋白质颗粒外面形成一层水化层，同时这些颗粒带有电荷，因而蛋白质溶液是相当稳定的亲水胶体。 + + + + + + + 带正电荷的蛋白质 － － － － － － － － 带负电荷的蛋白质 在等电点的蛋白质 水化膜 + + + + + + + + 带正电荷的蛋白质 － － － － － － － － 带负电荷的蛋白质 不稳定的蛋白质颗粒 酸 碱 酸 碱 酸 碱 脱水作用 脱水作用 脱水作用 溶液中蛋白质的聚沉 蛋白质胶体性质的应用 透析法:利用蛋白质不能透过半透膜的的性质，将含有小分子杂质的蛋白质溶液放入透析袋再置于流水中，小分子杂质被透析出，大分子蛋白质留在袋中，以达到纯化蛋白质的目的。这种方法称为透析（dialysis）。 透析与超过滤简易