肠道细菌实验.pptVIP

结果观察 ++++ 清澈透明，菌体形成凝块于管底 +++ 较透明，大部分菌体形成凝块于管底 ++ 稍浑浊，较多细小凝集 + 较浑浊，有细小凝集 － 浑浊，无凝集 血清凝集效价： (抗体滴度) 与定量Ag产生明显凝集（++）的血清最高稀释倍数 [参考值]??? 伤寒杆菌凝集价H1：160，O1：80；??? 副伤寒凝集价A1：80，B1：80， C1：80 [临床意义]机体感染伤寒、副伤寒杆菌后会产生相应抗体，正常人因隐性感染或预防接种，血清中可含有一定量的抗体。一般当H≥1：160，O≥1：80，副伤寒凝集价≥1：80时，才有诊断意义。病程中应每周复查一次，如病人H与O的凝集价均高于参考值或较原凝集价升高4倍以上，则患伤寒的可能性很大。若H凝集价高而O低于正常值，则可能是以往预防接种疫苗的结果或非特异性回忆反应所致。 O抗原 沙门菌属间有交叉反应 IgM H抗原 种特异性 -- 伤寒沙门菌 IgG 甲型副伤寒沙门菌 乙型副伤寒沙门菌 结果分析 O与H抗体的诊断意义 O抗体：IgM H抗体：IgG O抗体 H抗体 诊断 ↑ ↑ 肠热症 ↑ ― 感染早期或与伤寒沙门菌O抗原有交叉反应的其他沙门菌感染 ― ↑ 预防接种或非特异性回忆反应 ― ― 患病可能性小 （2）少数肠热症患者，由于发病初期曾使用大量抗生素，或机体有免疫缺陷病，或机机反应性极弱等原因，抗体效价可以很低，甚至为阴性结果。 因此不能只根据肥达氏试验的结果去作简单肯定或否定的结论，必须结合当地流行情况，既往接触史，以及临床症状和体征，作出正确的判断。 谢谢大家！ 第四次实验课内容 1、细菌代谢产物检查（示教） 2、肠道杆菌在选择鉴别培养基的生长情况 （示教） SS平板、双糖铁培养基 3、肥达试验（结果示教） 实验一 细菌代谢产物检查 细菌具有不同的代谢酶系统，因此对营养物质的利用与分解能力也各不相同，可形成不同的中间代谢产物与终末代谢产物。根据细菌的代谢能力及其产物不同鉴别细菌，称为细菌的生化反应。本实验通过介绍常用生化反应的经典试验方法，以了解细菌生化反应的机制与实验原理。 原理： 染色镜检 普通琼脂平板中菌落的形态 不能鉴别 能够鉴别 实验一 细菌代谢产物检查 细菌代谢产物 分解代谢产物 合成代谢产物 生化反应 ? 细菌菌落的色素观察 金黄色葡萄球菌：产生只局限于菌落的脂溶性金黄色色素。 铜绿假单胞菌：产生带荧光的水溶性色素，该色素可扩散至菌落周围，使培养基呈亮绿色。 金黄色葡萄球菌 铜绿假单胞菌 细菌菌落的溶血现象观察 乙型溶血性链球菌:透明的无色溶血环。 一、糖发酵试验 1.了解糖发酵的原理和在肠道细菌鉴定中的重要作用。 2.掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。 基本原理 糖发酵试验是最常用的生化反应，在肠道细菌的鉴定上尤为重要。绝大多数细菌都能利用糖类作为碳源和能源，但是它们在分解糖的能力上有很大的差异，有些细菌能分解某种糖并产酸（如乳酸、醋酸、丙酸等）和气体（如氢、甲烷、二氧化碳等）；有些细菌只产酸不产气。例如大肠杆菌能分解乳糖和葡萄糖产酸并产气；痢疾杆菌能分解葡萄糖产酸不产气，不能分解乳糖；乙型副伤寒杆菌分解葡萄糖产酸产气，不能分解乳糖。 基本原理 酸的产生可利用指示剂来断定。在配制培养基时预先加入溴甲酚紫[Ph5.2（黄色）-6.8（紫色）]，当发酵产酸时，可使培养基由紫色变为黄色。 气体的产生可由发酵管中倒置的德汉氏小管中有无气泡来证明。 糖发酵试验： 乳糖 乳酸 乳糖酶 葡萄糖发酵试验： 细 菌 葡萄糖 丙酮酸 各种酸类 甲 酸 H2 + CO2 脱氢酶 四、操作步骤 1、编号 用记号笔在各试管上分别标明发酵培养基名称和所接种的菌名。 2、接种 取盛有葡萄糖发酵培养基的试管3支，分别接种大肠杆菌、痢疾杆菌、乙型副伤寒杆菌。另取乳糖发酵培养基试管3支，分别接种这三种细菌。 3．将上述已接种的葡萄糖和乳糖发酵试管和对照管置37℃温室中培养24小时。 图1 糖类发酵试验 观察结果: 观察结果时，看各管颜色变化及杜氏小管有无气泡。 产酸产气用“⊕”表示； 只产酸不产气用“+”表示； 不产酸也不产气用“—”表示。 二、靛基质（吲哚）产生试验(I) 原理： 分解蛋白胨内的色氨酸形