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- 2019-06-08 发布于浙江
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专题1 基因工程
1.基因工程又叫做 或 。就是按照人们的愿望,把一种生物的某种基因提取出来,加以 ,然后放到另一种生物的细胞里, 改造生物的 。
2.基因工程是在 上进行的设计施工,基本工具是:基因的剪刀(分子手术刀)—— ;基因的针线(分子缝合针)—— ;基因的 (分子运输车)—— 。
3.限制酶(又称 ):主要从 中分离纯化出来;能够识别双链DNA分子的某种 ,并且使每一条链中 的两个核苷酸之间的 断开,因此具有 。DNA分子经限制酶切割产生的DNA片段末端有 和 两种形式。例如,EcoRⅠ限制酶识别的序列是 ,在 之间切割;SmaⅠ限制酶识别的序列是 ,在 之间切割。
4.DNA连接酶的作用是将 拼接(即形成 ,注意不是黏合或形成氢键)成新的DNA分子(注意DNA聚合酶只能在有 的条件下将 加到DNA片段的 ,形成磷酸二酯键);E·coli DNA连接酶来源于 ,只能将双链DNA片段 之间连接起来;而T4 DNA连接酶能缝合 ,但连接平末端的之间的效率 。
5. 最常用的载体是 ,它是一种 、结构简单、独立于细菌 之外,并
的很小的 。
6.真正被用作载体的质粒都是在天然质粒的基础上进行过 的,其上有一个至多个 ,供外源DNA片段(基因)插入其中;还有特殊的 ,供 。
7.重组质粒进入受体细胞后,在细胞中进行自我复制(具有 ),或 上,随染色体DNA进行同步复制;在基因工程中使用的载体除质粒外,还 、 等。
8.基因工程的基本操作流程: → →
→ 。
9.目的基因主要是指 ,也可以是一些 ;目的基因可以从自然界中已有的物种中分离出来( ,建立 从中获取或通过 获取,一般只适合于 ,真核基因因为含有 不适合该类方法),也可以用人工的方法合成( ,通过mRNA反转录得到cDNA,然后建立 从中获取或通过 获取;如果基因比较小且核苷酸序列已知,也可以通过 用化学方法直接人工合成)。
10.基因组文库的构建:将某种生物体内的DNA 提取出来,选用适当的 ,将DNA切成一定范围大小的DNA片段,然后,将这些DNA片段分别与 连接起来,导入 中储存,每个受体细菌都含有了一段不同的DNA片段,而这个群体包含了这种生物的 。
11.cDNA文库的构建:用某种生物发育的 通过 产生 (互补DNA)片段,与 连接后储存在一个受体菌群中。
12.cDNA文库属于 。与基因组文库比较:cDNA文库较小, ,仅含有某种生物的 , ;而基因组文库较大, ,含有某种生物的 ,仅 。
13.PCR是 的缩写,它是一项利用 的原理在生物 的核酸合成技术。反应中需要加入的物质有 、
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