马槟榔DNA提取及其RAPD反应体系的优化.doc

马槟榔DNA提取及其RAPD反应体系的优化 基因组学与应用生物学,2011年,第30卷,第1期,第117—121页 GenomicsandAppliedBiology,2011,Vo1.30,No.1,117—12l 技术改进 UpgratedTechnology 马槟榔DNA提取及其RAPD反应体系的优化 于旭东张超顾文亮胡新文2郭建春 1中国热带农业科学院热带生物技术研究所,海口,571101;2海南大学农学院,海口,570228;3海南大学园艺园林学院,儋州,571737 通讯作者,jianchunguoh@163.6om 摘要马槟榔是我国特有的仅分布在热带,亚热带地区的珍稀濒危野生果树,马槟榔种子中所富含的植物 甜蛋白马宾灵(Mabinlin)在食品甜味剂领域有着广阔的应用前景.为了对我国马槟榔野生种质资源进行遗传 多样性分析,本研究建立并优化了马槟榔基因组DNA的RAPD技术最优反应体系.结果表明,采用 SDS-CTAB方法提取的马槟榔基因组DNA满足RAPD试验要求;RAPD最优反应体系(25L)为:引物的终 浓度为1.0ixmol/L,dNTPs的终浓度为0.2mmol/L,模板DNA的终浓度为l600ng/L,DNA聚合酶用量 为40U/L.本研究通过对马槟榔DNA的提取及RAPD反应体系的优化,旨在为下一步对我国马槟榔野生种 质资源进行遗传多样性分析提供基础. 关键词马槟榔,RAPD,反应体系,种质 ExtrationofGenomicDNAofCapparismasaikaiL6v1andOptimizationof theRAPDReactionSystem YuXudongZhangChaoGuWenliangHuXinwenGuoJianchun 1InstituteofTropicalBioscienceandBiotechnology,ChineseAcademyofTropicalAgriculturalSciences,Haikou,571101;2CollegeofAgriculture HainanUniversity,Haikou,570228;3CollegeofHorticultureandLandscapeArchitecture,HainanUniversity,Danzhou,571737 Correspondingauthor,jianchunguoh@163.coin DOI:10.3969/gab.030.000117 AbstractCapparismasaikaiL6vlisanrareandendangeredspecieofwildfruittreewhichonlydistributesin tropicalandsubtropicalregionsofChina.TheplantsweetproteinMabinlinwhichisrichintheseedsofCapparis masaikaiL6vlhasabroadapplicationprospectsinthefoodsweetenersindustry.Inordertoanalysisthegeneticdi- versityofthewildCapparismasaikaiL6v1germplasm,thisresearchaimedtoscreenoutoptimumRAPDreaction systemforgenomicDNAofCapparismasaikaiL6v1.TheresultsshowedthattheimprovedSDS-CTABDNAex— tractionmethodwasusedtoextractedthegenomicDNAoftheleavesofCapparismasaikaiL6v1.Thesinglefactor experimentwasadoptedtoselecttheoptimizationthedNTPsconcentration,templateDNAconcentration,M concentration,raqenzymeconcentrationandtheprimerconcentration.Theresultsshowsthattheoptimumreaction system(25IxL)forRAPDamplificationoftheCapparismasaikaiL6vlDNAwaslistedasfollows:1.0p~mol/L primer,0.2mmol/LdNTPs,1600ng/LDNAand40U/Lenzyme.Alltheresultsofthisinvestigationcouldbe usedf