基因工程步骤课件.pptVIP

终止子的作用是什么？ 终止子是位于基因尾端的一段特殊的DNA片断，能终止mRNA的转录。 是为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将有目的基因的细胞筛选出来。 标记基因有什么作用？ 。 1、原理： 借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径 三、将目的基因导入受体细胞 2、方法 将目的基因导入 植物细胞 将目的基因导入 动物细胞 将目的基因导入 微生物细胞 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 ——显微注射法 ——感受态细胞 。 一、学习目标 简述基因工程原理及基本操作过程 二、学习重点和难点 1、基因工程基本操作程序的四个步骤（重点） 2、从基因文库中获取目的基因（难点） 3、利用PCR技术扩增目的基因（难点） 1.2基因工程的基本操作程序 。 真核细胞的基因结构 编码区 非编码区 非编码区 编码区下游 调控遗传信息的表达 (调控序列) 外显子 (能编码蛋白质) 内含子 (不能编码蛋白质) 启动子 终止子 。 非编码区 非编码区 编码区 与RNA聚合酶结合位点 外显子 内含子 1 2 3 4 5 转 录 mRNA前体 成熟mRNA 加 工 切除内含子转录部分 。 原核细胞的基因结构 非编码区 非编码区 编码区 编码区上游 编码区下游 与RNA聚合酶结合位点 启动子 终止子 能转录相应的信使RNA，能编码蛋白质 。 基因工程的基本操作程序 目的基因的获取 基因表达载体的构建 将目的基因导入受体细胞 目的基因的检测与鉴定 。 一、目的基因的获取 用3分钟阅读P8-11，并思考下列问题，然后用2分钟与同桌交流、讨论。 1、获取目的基因的常用方法有哪些? 2、何谓基因文库？其类型有哪几种？ 3、如何构建基因文库？ 4、何谓PCR技术？其原理、条件和过程是怎样的？ 。 一、目的基因的获取 1、目的基因：主要指的是编码蛋白质的结构基因，也可以是一些具有调控作用的因子。 2、获取方法： （1）从基因文库中获取目的基因； （2）利用PCR技术扩增目的基因； （3）通过DNA合成仪用化学方法直接合成 。 3、基因文库 　　 又称DNA文库，将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因，所有受体菌的集合即为该生物的基因文库。 基因文库由外源DNA片段、载体和宿主组成。 按外源DNA片段的来源分基因文库分为： 基因组DNA文库：包含了某物种的所有的基因 部分基因文库：只包含了部分基因文库（如cDNA文库） 。 。 1）载体DNA片段的制备 DNA分离纯化→限制酶切 2）供体DNA片段的制备 总DNA分离纯化→酶切法→分离特定大小DNA片段 3）载体与基因组DNA片段的连接 4）重组DNA转化受体细胞 4.基因文库的构建 。 ①基因组文库的构建 通过对受体菌的培养而储存基因 。 ② cDNA文库的构建 （反转录法） 目的基因的mRNA 单链DNA 反转录酶 DNA聚合酶 双链DNA(目的基因) 接到载体 。 ③基因组文库和部分基因文库的比较 文库类型 cDNA文库 基因组文库 文库大小 基因中启动子 基因中内含子 基因多少 物种间基因交流 小 大 无 有 无 有 某种生物的部分基因 某种生物的全部基因 可以 部分基因可以 。 思考：怎样从基因文库中得到我们所需的目的基因？ 根据基因的有关信息如根据基因的转录产物mRNA、基因的核苷酸序列、基因翻译产物蛋白质等来获取目的基因。 。 2、利用PCR技术扩增目的基因 —聚合酶链式反应 PCR 。 ① 概念：PCR全称为_______________，是一项在生物_______复制______________的核酸合成技术 ③条件：______________________________ __________________、 ___________ 、 ___________________ ②原理：________________ ④方式：以_____方式扩增，即____（n为扩增循环的次数） ⑤结果： 聚合酶链式反应 体外 特定DNA片段 DNA双链复制 已知基因的核苷酸序列(前提条件) 四种脱氧核苷酸 成对引物 DNA聚合酶(Taq酶） 指数 2n 使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增 。 ⑥过程： a、DNA变性（90℃-95℃）：双链DNA模板 在热作用下，_____断裂，形成_________ b、退火（复性55℃-65℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部________。 c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下， 合成与模板互补的________。 氢键 单链DNA 双链 DNA链 。 PCR的基本反应