心血管疾病生物化学诊断.ppt

二、肌酸激酶及同工酶测定 （一）肌酸激酶及同工酶特点 1. 肌酸激酶（CK）分子量约86 kD，是由脑型（brain, B）和肌型（muscle, M）两种亚基组成的二聚体，形成3种同工酶：CK-BB主要存在于脑组织中；CK-MB和CK-MM存在各种肌肉组织中，骨骼肌中98%~99%是CK-MM，1%~2%是CK-MB；心肌中80%是CK-MM，15%~25%是CK-MB。 CK作为心肌损伤标志物包括总CK及CK-MB测定。 2. 在心、脑、肝的线粒体内、外膜间存在一种线粒体CK同工酶（mitochondria CK，CK-Mt）。CK-Mt在心肌中含量占总CK活性的15%。而约6%病人血浆中还存在巨CK，包括CK-BB和IgG形成的复合物（1型巨CK），以及CK-Mt的寡聚体（2型巨CK）。 （一）肌酸激酶及同工酶特点 3. M亚基上有易被血浆中羧肽酶水解的C-端赖氨酸残基，因此，血清CK-MM同工酶存在3种亚型： CK-MM1的2个亚基都缺失C-端赖氨酸残基； CK-MM2只有1个亚基有C-端赖氨酸残基； CK-MM3的2个亚基都含有C-端赖氨酸残基。 同理CK-MB同工酶存在两种亚型： 无C-端赖氨酸残基的CK-MB1；含1个C-端赖氨酸残基的CK-MB2。 （一）肌酸激酶及同工酶特点 血清CK-MB水平在AMI后3h~8h可高于参考范围上限，10h~24h达峰值。 若无再梗死或其他损伤，2d~3d恢复至正常水平。 CK-MB半衰期10h~12h。 （二）CK-MB出现与消失的时间 （三）肌酸激酶及同工酶检测原理 第一步反应中生成的肌酸，也可直接用双乙酰和α-萘酚反应显色，520nm测定其光密度代表CK活性。 1. 总CK活性测定 （推荐酶偶联法为参考方法） 340nm 首先测定血清总CK活性，然后加入抗M亚基抗体，抑制CK-MM和CK-MB中M亚基活性，再测定残留CK活性，即为CK-BB和CK-MB中B亚基活性。由于血清中CK-BB水平通常5U/L，可忽略。因此，认可残留CK活性即代表血清CK-MB水平。 现在推荐以抗CK-MB单克隆抗体的免疫法，测定CK-MB质量，反映血清（浆）CK-MB水平。该法特异性高，最低检测限可达1μg/L。 2. 血清CK-MB活性测定 （免疫抑制法） （三）肌酸激酶及同工酶检测原理 （四） CK与CK-MB参考范围及及应用 酶偶联法（37℃）血清CK总活性为： 46U/L~171U/L（男）；34U/L~145 U/L（女） 酶活性法：CK-MB活性25U/L 质量法：CK-MB为5μg/L （四） CK与CK-MB参考范围及及应用 （1）CK-MB/CK比值 临床常使用CK-MB/CK比值，当CK-MB用质量法时，此比值称CK-MB百分相对指数（CK-MB%RI）。CK-MB质量（μg/L）/ CK（U/L）比值 5% 当CK-MB用酶活性法时，此比值称百分CK-MB（CK-MB % ）。CK-MB活性/CK比值 4% 缺血时，心肌中CK-MB/CK比值可有2~3倍增加。 AMI时，CK-MB/CK比值显著升高，在CK总活性升高的同时，CK-MB质量 5μg/L，活性 25U/L，以及CK-MB%RI 5%，或CK-MB %升高至4%~25%间。 （1）CK-MB/CK比值 （2）鉴别诊断 如果总CK 100U/L，CK-MB 24U/L，但CK-MB % 4%，多考虑肌肉疾病。 如果总CK 100U/L， CK-MB % 25%，考虑有CK-BB或巨型CK存在。 （五）肌酸激酶及同工酶检测的影响因素 1.其它相关酶的干扰 2.各种骨骼肌疾患和中枢神经系统疾患 3.甲状腺功能紊乱 4.药物干扰 三、肌红蛋白测定 （一）肌红蛋白特点 Mb在心肌中含量较丰富，且存在于胞浆中，分子量较小，故心肌损伤早期即可大量漏出至血中。 （二）肌红蛋白在血循环中出现和消失的时间 在AMI发生1h后，血中Mb水平即可高于参考范围上限, 4~12 h达峰值。如无再梗死发生约24h~36 h内即降至正常。 免疫法：男性80μg/L, 女性60μg/L 老年人血清Mb水平随年龄增加逐渐轻度升高。 （三）肌红蛋白检测原理与参考范围