津田芜菁花色素苷生物合成相关基因的表达资料精.pdfVIP

植物生理与分子生物学学报, Journal of Plant Physiology and Molecular Biology 2006, 32 (5): 583-586 583 ‘ 津田芜菁’ 花色素苷生物合成相关基因的表达 许志茹，李玉花* 东北林业大学生命科学学院，哈尔滨 150040 摘要：利用黑暗、日光、人工恒定光处理花色素苷合成 1　材料与方法 依光型的‘ 津田芜菁’ 试材。通过紫外- 可见分光光度计 测定恒定光处理下‘ 津田芜菁’ 块根皮中花色素苷的含 1.1　材料 量，结果表明，花色素苷含量与光处理时间成正相关。用 取温室种植的‘津田芜菁’ (‘Tsuda’ turnip) 自交纯 从消减文库中筛选的花色素苷生物合成基因片段制备探 系块根放在土中避光生长。块根膨大 2 个月后进行 针，Northern 杂交结果显示，在所处理的48 h 之内，光 光照处理。分别用日光( 自然光照，春分时节一天 可以诱导‘ 津田芜菁’ 中PAL 、DFR 、CHS、F3H 和ANS 中光强度有所变化，非定值) 处理块根 0 h 、3 h 、6 基因的表达，这些基因的表达量随着光处理时间的延长 而增加，而MYB 基因的表达量在黑暗与光下基本相同。 h 、9 h 、12 h、24 h 和 48 h ，人工气候箱中的恒 定光(27.9 W/m2) 处理块根 0 h 、6 h 、12 h、18 h、 关键词：‘ 津田芜菁’；光；花色素苷；基因表达 24 h 和 48 h ，取处理的块根和未光照的白色对照块 中图分类号：Q7 4 根进行试验。 1.2　引物序列与试剂 花色素苷包括花青素、花葵素和翠雀素，花色 从本实验室构建的 ‘ 津田芜菁 ’ 的消减文库(‘ 津 素苷的种类和数量决定花、果实和种子的颜色。花 田芜菁’光照处理的红色块根皮消减未光照的白色块 色素苷由一系列酶催化合成，目前对花色素苷合成 根皮) 中筛选到了PAL 、CHS 、F3H 、DFR 、ANS 途径的研究已取得一定进展，一些催化合成花色素 和MYB 的基因片段，用primer primer 5 软件设计探 苷的酶基因已被克隆( 赵云鹏等 2003) 。采用反义 针合成的引物。 RNA 技术及过量表达新基因等技术已实现了对花色 Ex-Taq 聚合酶及 DNA Marker 等购自宝生物工 的修饰(柴明良和汪炳良 2002) 。已知的催化花色素 程( 大连) 有限公司。Northern 杂交部分试剂购自 苷生物合成的主要酶有：苯丙氨酸解氨酶(PAL) 、 Roce 公司。 苯基苯乙烯酮合成酶(CHS) 、苯基苯乙烯酮黄烷酮 Trizol RNA 提取液：硫氢酸胍 0.8 mol/L ，硫 异构酶(CHI) 、黄烷酮-3- 羟化酶(F3H) 、二氢黄酮 氢酸铵 0.4 mol/L ，醋酸钠0.1 mol/L (pH 5.0) ，5% 甘油，38% Tris- 饱和苯酚。 醇 -4- 还原酶(DFR)、花色素合成酶(ANS)和类黄酮 - 1.3　色素含量的测定 3-O- 葡糖基转移酶(UFGT) 。花色素苷的生物合成需 对未见光的 ‘ 津田芜菁 ’ 块根进行恒定光照处 要转录因子的调控(Mehrtens 等 2005) ，并且花色素