IL-6-诱导LNCaP-上皮间质转化(EMT)并增强细胞对抗雄.docVIP

二甲双胍抑制IL-6诱导的LNCaP增殖及上皮间质转化 章国亮1，姜 庆1，江 军2 （400010 重庆，重庆医科大学附属第二医院泌尿外科1；400042 重庆，第三军医大学大坪医院野战外科研究所泌尿外科2） [摘要] 目的 探索二甲双胍抑制前列腺癌发展的作用机制。方法 使用慢病毒感染构建IL-6过表达细胞株LNCaP-IL-6（IL-6过表达病毒转染）和LNCaP-ctr（空病毒转染），运用激光共聚焦扫描确定转染效果，ELISA检测LNCaP、LNCaP-IL-6和LNCaP-ctr细胞IL-6分泌水平，倒置显微镜观察细胞形态。实验分为LNCaP-ctr组、LNCaP-IL-6组、LNCaP-ctr+二甲双胍组和LNCaP-IL-6+二甲双胍组，MTT技术检测相对细胞数量，流式细胞技术检测二甲双胍对细胞周期的影响；Western blot检测LNCaP-IL-6和LNCaP-ctr细胞TWIST和E-Cadherin表达水平。实验分为LNCaP-IL-6和LNCaP-IL-6+二甲双胍组，运用细胞迁移实验检测两组细胞迁移速度，Western blot技术检测两组细胞TWIST和E-cadherin表达水平。结果 激光共聚焦扫描和ELISA检测证明IL-6过表达细胞株LNCaP-IL-6构建成功，LNCaP-IL-6细胞IL-6分泌水平约为LNCaP-ctr的5 000倍。MTT实验显示第5天LNCaP-IL-6相对细胞数量约为LNCaP-ctr的1.4倍，二甲双胍对LNCaP-IL-6和LNCaP-ctr的抑制率分别为0.58和0.65，处理组的LNCaP-IL-6相对细胞数量约为LNCaP-ctr的1.6倍；流式细胞仪检测显示二甲双胍阻滞LNCaP的细胞周期为S期。细胞形态学观察和Western blot检测证实IL-6诱导LNCaP发生上皮间质转化，细胞迁移实验显示二甲双胍可抑制LNCaP-IL-6细胞的迁移，Western blot进一步证实二甲双胍降低LNCaP-IL-6 TWIST表达及升高E-Cadherin表达。结论 二甲双胍能够抑制IL-6诱导的LNCaP细胞的上皮间质转化。 [关键词] 前列腺癌；二甲双胍；上皮间质转化；LNCaP [中图法分类号] [文献标志码] A ［基金项目］ 国家自然科学基金 H1619）；重庆市国际合作项目（ 2011GZ0047） ［通信作者］ 姜 庆，E-mail:jq001002@；江 军，E-mail: jiangjun1964@ Metformin inhibits IL-6 induced LNCaP proliferation and epithelial-mesenchymal transition Zhang Guoliang1， Jiang Qing1， Jiang Jun2 (Department of Urology , The Second Affiliated Hospital, Chongqing Medical University, Chongqing 400010;Department of Urology , Daping Hospital/Institute of Surgery Research, The Third Medical University, Chongqing 400042) [Abstratc] Objective Detecting the mechanism by which metformin inhibits prostate cancer progression.Methods lentivirus transfection was used to construct IL-6 over-expressing LNCaP stable cell line（LNCaP-IL-6） and LNCaP control cell line（LNCaP-ctr）,Then laser scanning confocal microscope and ELISA assay was used to confirm IL-6 over-expressing LNCaP cell line; morphology of the cells was observed under inverted microscope;The following experiments were carried out on the four groups:LNCaP-ctr，LNCaP-ctr with metformin，LNCaP-IL-6 and LN