Folin-酚法测定蛋白质含量的原理第一步反应.pptVIP

谷胱甘肽转硫酶的制备及动力学研究 实验内容： （一）亲和层析法制备谷胱甘肽转硫酶 （二）测定酶活力、米氏常数和最大反应速度 （三）Folin-酚法测定蛋白质含量，计算比活力 课前思考题 蛋白质定量测定常见的方法有哪些？ Folin-酚法测定蛋白质含量的原理是什么？它具有什么优点和缺点？ 在实验操作中应注意哪些问题？（参考定磷法） 酶的比活力的意义是什么？计算时应注意哪些问题？ 蛋白质定量测定常见的方法 目前常用的蛋白质含量测定方法有两类：一类是利用蛋白质的物理化学性质，另一类是利用化学方法来测定，可以根据实验要求和实验室条件选择适当的测定方法。 Folin-酚法测定蛋白质含量的原理 第一步反应 蛋白质的肽键与双缩脲结构相似，与甲试剂中的酒石酸钾钠-铜盐溶液起作用，发生双缩脲反应，在碱性条件下，生成Cu2+-蛋白质络和物。双缩脲反应仅与蛋白质的肽键结构有关，不受蛋白质氨基酸组成差异的影响。 操作步骤每人取16支试管，按下表平行操作： 注意事项 1. 用移液管准确移取溶液，要求标准蛋白质用差量法，溶液尽量放入试管底部。 2. 注意加样顺序和平行操作。 3. 加入酶液蛋白质的量应在标准曲线范围之内。 4. 加入乙试剂后，应