郭江波分子生物学讲义-第四章.ppt

第四章 生物信息的传递（下） —从mRNA到蛋白质 蛋白质是生物信息通路上的终产物，一个活细胞在任何发育阶段都需要数千种不同的蛋白质。 活细胞内时刻进行着各种蛋白质的合成、修饰、运转和降解反应。 蛋白质由20中氨基酸组成。 翻译：指将mRNA链上的核甘酸从一个特定的起始位点开始，按每三个核苷酸代表一个氨基酸的原则，依次合成一条多肽链的过程。 蛋白质的生物合成 ? 场所：核糖体； 模板：mRNA； 转移RNA(tRNA)是模板与氨基酸之间的接合体。 蛋白质合成需要多种蛋白质、酶和其他生物大分子的参与(50% of the cell’s dry weight)。 蛋白质合成是一个需能反应(80-90% of the cell’s energy)。 蛋白质生物合成 ● 遗传密码——三联子 ● tRNA的结构、功能与种类 ● 核糖体的结构与功能 ● 蛋白质合成的过程 ● 蛋白质的运转机制 一、遗传密码——三联子 （一）三联子密码定义 mRNA链上每三个核苷酸翻译成蛋白质多肽链上的一个氨基酸，这三个核甘酸就称为密码子或三联子密码(triplet codon) 。 （二）三联子密码破译 1961年，Brenner和Grick根据DNA链与蛋白质链的共线性(colinearity)，首先肯定了三个核苷酸的推理。随后的实验研究证明上述假想是正确的。 1962年，克里克用T4噬菌体侵染大肠杆菌，发现蛋白质中的氨基酸顺序是由相邻三个核苷酸为一组遗传密码来决定的。由于三个核苷酸为一个信息单位，有43=64种组合，足够20种氨基酸用了 。 rⅡ：编码基因是否正确表达决定噬菌体是否能侵染大肠杆菌 吖啶类试剂 1961年Nirenberg建立了无细胞系统 以poly（GUA）为模板： 5’GUA GUA GUA GUA 3’ poly(Val) 5’UAG UAG UAG UAG 3 5’AGU AGU AGU AGU 3 poly(Ser) 补充： ▲ 体外翻译系统又称无细胞蛋白质合成系统，是分子生物学中一种常规的表达系统，该系统可用于蛋白质快速分析鉴定，基因转录和翻译的调控机理的研究以及分子间的相互作用的研究，如蛋白质和蛋白质的相互作用，蛋白质与DNA的相互作用，蛋白质与RNA的相互作用等。 ▲ 用于蛋白质的生物合成研究的体外翻译系统主要有：细菌（大肠杆菌）无细胞系统、网织红细胞裂解系统和麦胚系统等。只要加入外源mRNA模板，则可进行体外翻译。 ▲ 核糖体结合技术 1964年，Nirenberg和Leder建立了aa-tRNA与确定密码子结合实验的破译密码新方法。 （三）遗传密码的性质 1、简并性 - we have 61 codons for 20 amino acids. Each codon codes for only one amino acid. Most amino acids have more than one codon! Arg, Ser, Leu ? 6 codons Gly, Thr, Ala, Val, Pro ? 4 codons Met, Trp ? 1 codon 2、通用性与特殊性 3、 连续性 从mRNA5?端起始密码子AUG到3?端终止密码子之间的核苷酸序列，各个三联体密码连续排列编码一个蛋白质多肽链，称为开放阅读框架(open reading frame, ORF)。 4、摆动性 密码子、反密码子配对的摆动现象 小结： (1) 遗传密码是三联体密码 (2)遗传密码无逗号 (3)遗传密码是不重迭的 (4)遗传密码具有通用性 (5)遗传密码具有简并性(degeneracy ) (6) 密码子有起始密码子和终止密码子 (7) 反密码子中的“ 摆动”（wobble） tRNA具有共同的特征 存在经过特殊修饰的碱基； 3’端都是CCA-OH，是tRNA与氨基酸结合的位点。 二、tRNA的结构、功能与种类 （一） tRNA的结构 tRNA凭借自身的反密码子与mRNA链上的密码子相识别，把所带氨基酸放到肽链的一定位置。 补充： ▲起始和延伸Met-tRNAs的区别 ⑴两种tRNA本身有差别； ⑵氨基酸的状态不同。 ▲ fMet-tRNA与Met-tRNA有什么不同？ ⑴ Met-tRNAmMet在受体臂末端的一对碱基是GC，在fMet-tRNAfMet是CA，C可以和起始因子IF-2结合。 ⑵tRNAfMet在反密码子环的茎上有3对G-C,若发生突变将会阻止其进入P位点。 ⑶tRNAfMet