低温冻存对兔脂肪间充质干细胞部分生物学特性的影响的试验研究.doc

低温冻存对兔脂肪间充质干细胞部分生物学特性的影响的实验研究 刘琴，陈芳，杨丽君，王丽平，朱以良，张宜 （解放军广州军区武汉总医院医学实验科，湖北省武汉市430070） 【摘要】目的 研究低温冻存后对兔脂肪间充质干细胞的部分生物学特性的影响。方法 采用组织块法分离培养兔脂肪间充质干细胞。用倒置显微镜观察原代细胞的细胞形态，流式细胞仪检测兔脂肪间充质干细胞的免疫表型。取第3代兔脂肪间充质干细胞置于-196℃液氮保存半年，37℃复苏并传至第7代。实验分为两组，实验组为冻存复苏后传至第7代的兔脂肪间充质干细胞，对照组为未冻存的第7代兔脂肪间充质干细胞，取复苏后传至第7代的兔脂肪间充质干细胞，用MTT绘制其生长曲线；添加成脂、成骨诱导液进行诱导，油红O、茜素红染色和碱性磷酸酶活性检测分别进行鉴定。结果 体外培养的兔脂肪间充质干细胞呈梭形纤维样细胞形态，生长力旺盛。流式细胞仪检测显示，第3代兔脂肪间充质干细胞强表达CD44、CD90，阴性表达造血细胞相关的表面标志CD45。冻存复苏后传至第7代的兔脂肪间充质干细胞生长力旺盛，两组细胞生长曲线呈典型的“S”形，无统计学差异（P0.05）；成脂诱导14d后，油红O染色呈阳性；成骨诱导2周时茜素红染色阳性，ALP表达活性随成骨诱导时间延长不断增加且无统计学差异（P0.05）（P0.01），于成骨诱导13d达平台期。结论 冻存后的兔脂肪间充质