干旱胁迫对水稻类囊体膜蛋白质组的变化研究.ppt

2.1.1 干旱胁迫对水稻生理活性的影响 干旱不但明显降低了植株的净光合速率，使叶绿体超微结构损坏，叶绿素含量降低，而且降低了Rubisco酶和碳酸酐酶等酶的活性。干旱也影响了其他与光合作用有关的生理生化过程，如降低气孔导度，使光合产物运输受阻等。当干旱达到一定程度，植物的光合机构就会遭到破坏，使光合能力出现大幅的下降。 2.1.2 干旱胁迫对水稻类囊体膜蛋白质组的影响 类囊体膜有四种复合体（光合系统I－PSI，光合系统II－PSII，ATP合成酶系，细胞色素b6/f复合体），它们各自又都有着辅助蛋白。这四种复合体至少含有70种蛋白质用以完成光合反应。干旱会引起类囊体膜上光能的吸收、传递和ATP合成的抑制。 2.1.3 干旱胁迫对水稻光合生理变化的调控机理 干旱是导致水稻光合潜能不能充分发挥、进而导致产量降低的最重要的环境因素。从蛋白质组水平可以更好地阐明干旱胁迫影响水稻光合生理的机制，如对光合作用光能利用效率和碳同化作用调节机理的认识等。 2.2 研究目标 （1）干旱处理条件下水稻生理生化特性 （2）建立或完善一套符合本实验室的叶绿体（及其亚组分）膜蛋白的提取和鉴定方法 （3）建立干旱处理的类囊体膜蛋白质组的变化图谱 （4）初步阐明干旱胁迫影响水稻光合生理的机制 2.3 拟解决的关键问题 （1） 如何简单有效分离高纯度的类囊体膜蛋白 （比如寻找适合水稻类囊体膜蛋白质组研究的 裂解液配方等） （2） 水稻类囊体膜蛋白质组图谱的建立 （3） 推断水稻光合作用受干旱胁迫的响应机理以 及植物对干旱环境的适应机制 3. 主要的实验方法 3.1 生理指标的测定方法 （1）土壤含水量的测定 土壤含水量（％）＝（土壤湿重－土壤干重）/土壤湿重×100 （2）叶片水势的测定 叶片水势用压力室法（Soilmoisture）测定。 （3）叶片光合速率、气孔导度和叶绿素荧光参数的测定 用LI-6400P光合仪测水稻倒二叶的光合速率和气孔导度。 用叶绿素荧光仪测水稻倒二叶叶绿素荧光参数。 3.3 Western blotting法鉴定类囊体膜 3.6 数据库比对差异蛋白质 Mascot Wizard软件（Matrix Science Ltd.），设置适当的参数和数据库，对目的蛋白质的PMF进行网上数据库匹配。根据实际等电点和分子量以及匹配的结果确定与目的蛋白质的PMF最相符的蛋白质。 3.7 可行性分析 （1）本实验所提出的技术路线和实验方案是 切实可行的； （2）本研究所涉及的一些关键技术和研究方法 都是本实验室的常规方法； （3）本实验是由工作多年的青年教师完成， 长期从事蛋白质化学和蛋白质组学方面的 研究工作，积累了比较丰富的经验。 4、本研究的特色与创新 建立水稻蛋白质组学研究的技术平台 建立了一套分离纯化水稻叶绿体和类囊 体膜蛋白并对其鉴定的系统方法。 建立研究水稻（日本晴）响应干旱后类 囊体膜蛋白质组的变化以及阐明干旱胁 迫影响水稻光合生理的机制的系统方案 5.2 预期研究结果 （1）测定干旱处理条件下水稻生理生化特性 （2）建立或完善一套符合本实验室的叶绿体 （及其亚组分）膜蛋白质组学的研究方法 （3）建立干旱处理的水稻类囊体膜蛋白质组 的双向电泳图谱，初步阐明干旱胁迫影响 水稻光合生理的机制 6.1 工作基础 土壤干旱处理水稻样品培育技术 土壤含水量的测定技术 水稻蛋白质的提取和定量技术 蛋白质免疫印迹技术 双向电泳技术 银染和考染技术 图象分析技术 水稻蛋白质的原位酶解技术 质谱分析技术 6.2 前期研究工作的积累 （2）土壤干旱对水稻叶片水势的影响 随着停止灌溉时间的延长，9311和日本晴叶片水势均呈现明显下降趋势，品种间差异与土壤含水量的变化相似。 （4）干旱和强光对叶片叶绿素荧光特性的影响 随着干旱程度的加深， 日本晴的Fv/Fm迅速下降，复水以后重新回升。 光抑制的情况下，Fv/Fm下降更为显著。Fv’/Fm’呈现相似的变化趋势，但是强光处理对Fv’/Fm’的变化影响不大 （5）水稻叶片叶绿体提取和完整率的鉴定 采用差速离心和蔗糖密度梯度离心等方法所获得的叶绿体 经过荧光显微镜和光学显微镜检测，完整率和纯度高。 6.3 工作条件 现有的主要仪器设备 LI-6400P型光合仪 FMS-2型荧光仪 5810 R型冷冻离心机 Novalyple-NL500真空冻干仪 Virsonic 100型超声波破碎仪 PROTEANⅡ型电泳槽 IPGphor等