试验四脱氧核糖核酸的鉴定.ppt

实验三、实验四 DNA的定性鉴定— Feulgen反应 及DNA与RNA区分染色法 一、实验目的与原理 目的:1.学习Feulgen反应鉴定细胞内DNA的基本原理和方法； 2.学习DNA和RNA的区分染色法,了解DNA和RNA在细胞核中的存在和分布。 原理：细胞核中的染色质主要由脱氧核糖核酸（DNA）所组成.DNA系核苷酸的多聚体，核苷酸是由碱基、脱氧核糖和磷酸所组成，当细胞经60℃、1mol/L HCl处理后，破坏核内DNA链上的嘌呤碱基与脱氧核糖之间的糖苷键，嘌呤脱下，在C1位上形成醛基。醛基将无色的Feulgen试剂（主要成分是碱性品红，它在与亚硫酸作用时由醌型变为苯型成为无色的N-5磺酸亚酸碱性品红，即Feulgen 试剂的主要成分）恢复为醌型结构，出现紫红色，所以，凡是有DNA存在的部位就呈现紫红色的阳性反应。 染色质主要由DNA组成，而核仁主要成分是RNA。由于DNA和RNA在组成及结构上存在一定差别，因此，它们对不同的染料则具有不同的显色反应。Unna试剂（甲基绿-焦宁染色液）能分别与DNA和RNA结合而呈现不同颜色，即Brachet反应。甲基绿使DNA染成绿色，焦宁把核仁和细胞质中的RNA染成不同程度的红色。这样，从细胞不同的染色结果来证明和鉴定DNA和RNA的存在和分布。 * 二、实验材料与试剂 1.材料：洋葱鳞茎内表皮、蚕豆根尖 2.试剂： Schiff试剂、 Unna试剂、1mol/L HCl、 SO2溶液 三、实验内容与操作 1.DNA鉴定：取蚕豆根尖，放入小烧杯中，加入1mol/L HCl溶液浸没，置60℃中水解10min,弃溶液后，加入Schiff 试剂浸没，置暗处染色15min ,SO2溶液浸洗3min，水 洗3min,取一小块置于载玻片上，加盖玻片后显微观察。（设一对照组） 2. DNA与RNA区分染色：撕取洋葱鳞茎内表皮一小块置于载玻片上→加1滴Unna试剂染液，染色20min →流水冲洗后，吸水纸吸去水分→加盖玻片，显微观察。 四、实验报告 1. 绘图示洋葱鳞茎内表皮细胞经Schiff试剂染色后，细胞中DNA存在的部位； 2. 绘图示洋葱鳞茎内表皮细胞经Unna试剂染色后，细胞中DNA和RNA的分布。 *