抗菌肽产品研发背景.pptVIP

* 项目主要解决动物性食品抗生素残留问题，开发安全、高效的新型饲用抗生素替代品 – 天蚕素抗菌肽开发安全、是落实“科技促进市民生活质量改善”主题和 “北京市民健康生活促进科技专项”的具体行动 离子通道形成后可能导致病原菌细胞死亡的方式有多种，包括：1、物理损伤导致细胞膜破裂，内容物外泄，细胞因此裂解；2、离子通道导致大量K+外流，膜电势失去平衡，ATP合成受阻，细胞“窒息”而死；3、抗菌肽插入细胞膜后引起膜蛋白凝聚，膜的通透性被改变，膜功能紊乱，终至细胞死亡；4、抗菌肽进入靶细胞内部，造成DNA等重要物质的破坏而杀死病原菌 * * 鲎（hou）素是由Nakamuro T等人从鲎血细胞小颗粒中分离提取的一类抗菌肽,具有抗细菌、真菌、病毒,抑制肿瘤细胞增殖和诱导癌细胞分化等生物活性,是一类具有巨大潜在应用价值的抗菌肽 。 由图1可知，对照组大肠杆菌F41形态规整，细胞壁完整，菌群未黏连成堆，未发现胞浆外泄现象；而处理组细胞形态发生明显变化，几乎没有完整的杆状细菌，细胞壁膜被破坏，胞浆大量外泄，菌群发生黏连，破碎和坍塌的细胞膜聚集在一起。 * 对照组金黄色葡萄球菌的菌群结构致密，排成葡萄状，细胞表面光滑，外观呈很规则的球形，粒径较为均一；处理组菌群结构松散，排列不规则，黏连成堆，菌体表面粗糙，部分菌体表面有突起皱褶产生，同时还可以看到少量原生质向外扩散，但细胞壁膜结构完整且未发生变化。 * 对照组伤寒沙门菌结构完整，细胞壁膜完整，细胞饱满充实，细胞质均匀，细胞器、细胞核区完整；处理组菌体局部细胞壁膜被破坏，出现明显的质壁分离现象，但细胞核区并未发生明显变化。 对照组金黄色葡萄球菌结构完整，可清楚地看到细胞壁膜结构，细胞质充实、致密，细胞器未发生变化，细胞核区明显并明显结块现象；处理组部分细胞壁完整，未发生明显变化，但处理组的细胞膜出现两处明显的孔道，细胞质结构松弛，细胞核区消失。 金黄色葡萄球菌ATCC259-23株在扫描电镜下观察为圆球形，外观饱满，直径约0.8-1.2um，排列成葡萄串状（图5）。当金黄色葡萄球菌与猪小肠抗菌肽作用后，其形态发生改变、皱缩，有的细菌表面有明显的凹陷或孔洞，有的细菌表面还有囊泡或突起样结构。 * 第一，成功构建了天蚕素抗菌肽的枯草杆菌表达载体，每毫升发酵液中产品的含量达到1.1毫克，该表达量可以进行产业化生产 Salmonella typhimurium鼠伤寒沙门氏菌， Salmonella enteritidis肠炎沙门氏菌，Staphylococcus aureus金葡菌，Streptococcus faecalis 粪链球菌 抗菌肽的抗菌机理-高度选择性 鲎素 (谢海伟等，2008) 鲎素 鲎素 猪小肠抗菌肽 (马卫明等，2005) * 抗菌肽是动物体免疫组成的实例 始作俑者： 甲类链球菌 受害者： 人类皮肤 小鼠模型验证抗菌肽cathelicidin抑制甲型链球菌作用 小鼠模型成立的条件： a：小鼠有与人类相似的cathelicidin抗菌肽家族（CRAMP和 LL- 37），且由类似的基因编码（Cnlp和CAMP）； b：两种抗菌肽有相似的α-螺旋结构、抗菌谱和组织分布状况。 验证方案： 1：敲除小鼠Cnlp，使其无法合成cathelicidin抗菌肽，感染甲型链球菌并观察皮肤溃烂状况，与正常小鼠对照； 2：从对照和敲除基因的感染小鼠取样做组织培养，并在敲除基因小鼠的培养物中添加抗菌肽CRAMP，观察病菌数量； （Nizet等，2001） 正常对照组小鼠组织培养物内病菌极少 敲除基因但添加抗菌肽小鼠组织培养物内病菌数量较少，病菌受到抗菌肽抑制 敲除基因未添加抗菌肽小鼠组织培养物内病菌数量最多 抗菌肽与抗生素作用的比较 来源：抗生素来源于微生物，抗菌肽是动植物和微生物防御系统的组成部分。 作用范围：抗生素仅能杀死与抑制细菌，抗菌肽不仅对细菌有抑制和杀灭作用，还对真菌、病毒和肿瘤细胞有抑制作用。 对细菌的作用机理：抗生素作用的基础是与细菌细胞膜的受体结合，抗菌肽通过物理消融作用于细胞膜，这是抗菌肽不易产生耐药性的重要原因。 与机体免疫的关系：抗菌肽诱导非特异性免疫反应，范围广泛，是其不易产生耐药性的另一个原因。 抗菌肽比抗生素作用效果快。 * 抗菌肽的应用 食品防腐保鲜乳链菌肽（nisin） 医药消炎、抗感染、抗真菌 保健品国内已有抗菌肽概念的“食字号”保健品上市，其中大部分为技术含量较低的昆虫蛋白 日化日用化工产品主要集中在化妆品上，以创伤疤痕修复为主，兼具温和杀菌、抗感染和消除红肿等功效 公司 名称 来源 临床适应症 开发进展 AM Pharma human lactoferricin hLF1-11 人乳铁蛋白重组 抗真菌和细菌 Phase IIa阶段（抑制造血干细胞移植病